应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落PCR后测序无信号
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
101/1返回列表
查看: 3086  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

人于两点

铜虫 (小有名气)

[求助] 菌落PCR后测序无信号

如题，酶切质粒和DNA片段，连接，热激转化，10个菌落PCR，验证6个阳性，可是送过去测序，却是测序无信号！
一直屡败屡战，总结原因，可能是由于质粒是低拷贝质粒，每次酶切过后，回收质粒的浓度总是很低，不到20ug/ul。
所以，求助各位大神，能给点建议吗？万分感谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-08-21 22:09:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuanyeguhong

至尊木虫 (文坛精英)
★
人于两点(金币+1): 谢谢参与
顶贴！
回复此楼
原野孤鸿
2楼2014-08-21 22:18:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dmbb
★
人于两点(金币+1): 谢谢参与
3楼2014-08-21 22:29:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦小浅
★
人于两点(金币+1): 谢谢参与
4楼2014-08-21 22:30:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kiss20085537
★
人于两点(金币+1): 谢谢参与
5楼2014-08-21 22:34:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zls6110
★
人于两点(金币+1): 谢谢参与
6楼2014-08-21 22:49:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2328980933
7楼2014-08-21 22:51:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xipha

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-22 14:39:18
测序的时候送的是菌还是质粒,如果是测菌测不出来,你可以自己多摇一些,然后把质粒提出来送测序.
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2014-08-22 01:40:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

人于两点

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xipha at 2014-08-22 01:40:18
测序的时候送的是菌还是质粒,如果是测菌测不出来,你可以自己多摇一些,然后把质粒提出来送测序.

我送的是质粒测序，不过浓度很低，质粒大小约6500bp，浓度是70ug/ul。
赞一下 回复此楼
9楼2014-08-22 14:36:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xipha

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 人于两点 at 2014-08-22 14:36:46
我送的是质粒测序，不过浓度很低，质粒大小约6500bp，浓度是70ug/ul。...

70ug/ul 应该够了啊. 如果测序引物什么的都没问题,只是浓度低的话,你可以试试手配碱式裂解法试剂,摇250ml菌,提质粒. 先前我们那儿有人就是这么干的. 其实不是很麻烦.
赞一下 回复此楼
10楼2014-08-23 06:43:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 人于两点 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +7 双马尾痞老板2 2026-04-01 7/350 2026-04-02 06:08 by 286640313
[考研] 288求调剂 一志愿哈工大 材料与化工 +28 洛神哥哥 2026-03-31 28/1400 2026-04-01 22:51 by peike
[考研] 298求调剂 +4 什么是胖头鱼 2026-03-30 6/300 2026-04-01 22:06 by 客尔美德
[考研] 286分调剂 +18 Faune 2026-03-30 20/1000 2026-04-01 21:37 by 495374996
[考研] 805600专硕材料与化工348分求调剂 +4 上学啦！ 2026-04-01 4/200 2026-04-01 21:10 by lijunpoly
[考研] 266分求材料化工冶金矿业等专业的调剂 +7 哇呼哼呼哼 2026-03-26 7/350 2026-04-01 20:47 by cqupH
[考研] 286求调剂 +5 lim0922 2026-03-26 5/250 2026-04-01 19:08 by 客尔美德
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358 +7 cs0106 2026-04-01 8/400 2026-04-01 18:34 by 记事本2026
[考研] 316求调剂 +9 舟自梗 2026-04-01 10/500 2026-04-01 18:13 by 无际的草原
[考研] 调剂 +3 好好读书。 2026-04-01 3/150 2026-04-01 17:06 by zhouyuwinner
[考研] 283求调剂 +9 A child 2026-03-28 9/450 2026-04-01 14:20 by Jaylen.
[考研] 311求调剂一志愿合肥工业大学 +14 秋二十二 2026-03-30 14/700 2026-04-01 11:45 by chemdavid
[考研] 086000生物与医药298调剂求助 +4 元元青青 2026-03-31 6/300 2026-04-01 11:13 by syh9288
[考研] 291求调剂 +3 迷蒙木木 2026-04-01 4/200 2026-04-01 11:07 by 逆水乘风
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +5 双马尾痞老板2 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:04 by oooqiao
[考研] 复试调剂 +7 双马尾痞老板2 2026-03-31 7/350 2026-03-31 19:49 by Dyhoer
[考研] 求调剂 +9 akdhjs 2026-03-31 10/500 2026-03-31 17:14 by zhyzzh
[考研] 343求调剂 +8 爱羁绊 2026-03-28 8/400 2026-03-31 16:12 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿厦门大学材料工程专硕354找调剂！！！ +5 贝呗钡钡 2026-03-30 5/250 2026-03-30 18:16 by 无际的草原
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭