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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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王恺龙2010

铜虫 (初入文坛)

[求助] dna测序没信号

dna测序没信号,怎么解?
是提纯模板,重新设计引物,还是正反向都测一边(目前只在生工侧过两次正向的)?
至于公司给出的建议,克隆到载体上用通用引物测序,这是根据什么?我目前没准备好克隆,必须这么做么。。。。
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-05-05 16:00:03
是将PCR产物进行测序吗?如果PCR产物测序的话需要对PCR产物切胶回收,采用ddH2O洗脱,洗脱之后跑胶看看有没有条带,如果有条带的话一般都能测序出来的
rainwater
2楼2014-05-05 10:27:39
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-05-05 16:00:11
建议你按照公司的要求来做,就是把你的目的基因克隆到T载体上,送菌液进行测序
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
3楼2014-05-05 12:07:47
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普通回帖

王恺龙2010

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-05-05 10:27:39
是将PCR产物进行测序吗?如果PCR产物测序的话需要对PCR产物切胶回收,采用ddH2O洗脱,洗脱之后跑胶看看有没有条带,如果有条带的话一般都能测序出来的

是这样做的,而且用我设计的引物得出的电泳条带还是很稳定的,所有组基本在一个位置,回收的条带十分之亮。结果告知没信号。。。
4楼2014-05-05 16:44:54
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王恺龙2010

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-05-05 12:07:47
建议你按照公司的要求来做,就是把你的目的基因克隆到T载体上,送菌液进行测序

必须如此吗?这样做有什么根据呢?导师要求pcr产物直接测序。
5楼2014-05-05 16:47:42
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 王恺龙2010 at 2014-05-05 16:47:42
必须如此吗?这样做有什么根据呢?导师要求pcr产物直接测序。...

我们实验室都是这么做的,或者送克隆后的质粒进行测序。如果你直接送PCR产物可能量很低,很难测,另外可能还需送你的引物,这样不是更麻烦吗?
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
6楼2014-05-05 17:08:27
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 王恺龙2010 at 2014-05-05 16:44:54
是这样做的,而且用我设计的引物得出的电泳条带还是很稳定的,所有组基本在一个位置,回收的条带十分之亮。结果告知没信号。。。...

送样测序的引物是PCR扩增时所用的引物吧,片段长度是多少?
rainwater
7楼2014-05-06 08:32:21
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王恺龙2010

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-05-06 08:32:21
送样测序的引物是PCR扩增时所用的引物吧,片段长度是多少?...

片段长度约在250左右,是扩增用的引物
8楼2014-05-06 09:34:28
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zhangjie2005

木虫 (小有名气)

换个测序公司试一下
9楼2014-05-06 09:39:38
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 王恺龙2010 at 2014-05-06 09:34:28
片段长度约在250左右,是扩增用的引物...

那就没问题了,让公司重新测吧,肯定是公司那边测的问题
rainwater
10楼2014-05-06 11:55:34
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