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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » dna测序没信号
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王恺龙2010

铜虫 (初入文坛)

[求助] dna测序没信号

dna测序没信号，怎么解？
是提纯模板，重新设计引物，还是正反向都测一边（目前只在生工侧过两次正向的）？
至于公司给出的建议，克隆到载体上用通用引物测序，这是根据什么？我目前没准备好克隆，必须这么做么。。。。
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1楼2014-05-05 08:33:34
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zhangyunjing

金虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-05 16:00:03
是将PCR产物进行测序吗？如果PCR产物测序的话需要对PCR产物切胶回收，采用ddH2O洗脱，洗脱之后跑胶看看有没有条带，如果有条带的话一般都能测序出来的
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rainwater
2楼2014-05-05 10:27:39
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-05 16:00:11
建议你按照公司的要求来做，就是把你的目的基因克隆到T载体上，送菌液进行测序
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
3楼2014-05-05 12:07:47
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普通回帖

王恺龙2010

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-05-05 10:27:39
是将PCR产物进行测序吗？如果PCR产物测序的话需要对PCR产物切胶回收，采用ddH2O洗脱，洗脱之后跑胶看看有没有条带，如果有条带的话一般都能测序出来的

是这样做的，而且用我设计的引物得出的电泳条带还是很稳定的，所有组基本在一个位置，回收的条带十分之亮。结果告知没信号。。。
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4楼2014-05-05 16:44:54
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王恺龙2010

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-05-05 12:07:47
建议你按照公司的要求来做，就是把你的目的基因克隆到T载体上，送菌液进行测序

必须如此吗？这样做有什么根据呢？导师要求pcr产物直接测序。
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5楼2014-05-05 16:47:42
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 王恺龙2010 at 2014-05-05 16:47:42
必须如此吗？这样做有什么根据呢？导师要求pcr产物直接测序。...

我们实验室都是这么做的，或者送克隆后的质粒进行测序。如果你直接送PCR产物可能量很低，很难测，另外可能还需送你的引物，这样不是更麻烦吗？
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
6楼2014-05-05 17:08:27
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 王恺龙2010 at 2014-05-05 16:44:54
是这样做的，而且用我设计的引物得出的电泳条带还是很稳定的，所有组基本在一个位置，回收的条带十分之亮。结果告知没信号。。。...

送样测序的引物是PCR扩增时所用的引物吧，片段长度是多少？
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rainwater
7楼2014-05-06 08:32:21
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王恺龙2010

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zhangyunjing at 2014-05-06 08:32:21
送样测序的引物是PCR扩增时所用的引物吧，片段长度是多少？...

片段长度约在250左右，是扩增用的引物
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8楼2014-05-06 09:34:28
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zhangjie2005

木虫 (小有名气)
换个测序公司试一下
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9楼2014-05-06 09:39:38
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 王恺龙2010 at 2014-05-06 09:34:28
片段长度约在250左右，是扩增用的引物...

那就没问题了，让公司重新测吧，肯定是公司那边测的问题
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rainwater
10楼2014-05-06 11:55:34
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