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1楼2014-08-17 11:03:12

漂流瓶1991

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第二张图片1和2号管都是317bp的电泳条带

2楼2014-08-17 11:04:30

nl2016

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回收3个片段后，分别测定3个片段的浓度，等量混合后做PCR就好了！

3楼2014-08-17 13:52:01

鬼羽帝魂

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每一个大约几十ng就好了

4楼2014-08-17 14:59:02

wangranjun

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最好的办法是分步融合……片段长度差的有点多，你可以先试一下三个等量融合PCR，若融合不出来就试一下两两融合吧！祝成功

他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！

5楼2014-08-17 15:03:44

漂流瓶1991

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引用回帖:

3楼: Originally posted by nl2016 at 2014-08-17 13:52:01
回收3个片段后，分别测定3个片段的浓度，等量混合后做PCR就好了！

对的，就是要测定三者的浓度，但我是研一新生提前进入实验室，不知道怎么测定所获片段浓度，求指点！我本来想根据跑胶条带分别和Marker亮度作比较，然后根据比例添加，可是感觉我自己认定的比例不怎么合理。

6楼2014-08-17 15:08:55

漂流瓶1991

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4楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-08-17 14:59:02
每一个大约几十ng就好了

不能等量添加吧？要看各片段浓度比的吧

7楼2014-08-17 15:09:27

漂流瓶1991

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5楼: Originally posted by wangranjun at 2014-08-17 15:03:44
最好的办法是分步融合……片段长度差的有点多，你可以先试一下三个等量融合PCR，若融合不出来就试一下两两融合吧！祝成功

谢谢，不过我觉得等量添加不怎么合理，

8楼2014-08-17 15:10:06

wangranjun

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8楼: Originally posted by 漂流瓶1991 at 2014-08-17 15:10:06
谢谢，不过我觉得等量添加不怎么合理，...

等量不是指加入的ul等量，是要测浓度后家等量ug的样本……

他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！

9楼2014-08-17 15:17:26

shuihaizi

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gyesang: 回帖置顶 2014-08-18 15:09:12

你可以这样试试：
1，50ulPCR回收后，1ul的上样量类似于你第一张图的泳道5
2，融合PCR时，50ul反应体系各加1ul
3，小片段因为比较短，加1ul也是可以的（按照等mol来算，有点多），也可适当减少点，为了做起来方便1ul也是可以的，先试试
4，如果三个片段长度都差不多，比较容易；所以，如果3个放一起，一次不能融合，最好，两端先融合，再第三段融合，模板用量都差不多

10楼2014-08-17 20:06:46