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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 融合PCR求经验指点
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漂流瓶1991

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by shuihaizi at 2014-08-17 20:06:46
你可以这样试试：
1，50ulPCR回收后，1ul的上样量类似于你第一张图的泳道5
2，融合PCR时，50ul反应体系各加1ul
3，小片段因为比较短，加1ul也是可以的（按照等mol来算，有点多），也可适当减少点，为了做起来方便 ...

非常感谢你的回帖！只是我之前做PCR用的是10ul体系，已经回收并检测如上图，三片段PCR还用10ul体系吧？难道要换？10ul体系也全加1ul？？这样浓度会不会差很多？？
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11楼2014-08-17 20:32:33
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zjnldx

木虫 (职业作家)
再接再厉，祝福
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12楼2014-08-17 20:58:34
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键盘上的脚丫

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
准备研一小硕冒个泡，不懂你这个。。。。
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13楼2014-08-17 22:18:48
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 漂流瓶1991 at 2014-08-17 15:09:27
不能等量添加吧？要看各片段浓度比的吧...

其实也没必要那么准确  大概的就行
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14楼2014-08-18 08:57:32
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mm的毛毛

木虫 (正式写手)

科研毛毛虫
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-18 15:09:36
建议分布融合，先把小的片段跟一个长的pcr连在一起，在用产物跟另一个长片段进行融合pcr。这样做会容易，对量的要求也不会太高，直接加样一般都能扩出。
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好想睡个好觉
15楼2014-08-18 11:23:21
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shuihaizi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 漂流瓶1991 at 2014-08-17 20:32:33
非常感谢你的回帖！只是我之前做PCR用的是10ul体系，已经回收并检测如上图，三片段PCR还用10ul体系吧？难道要换？10ul体系也全加1ul？？这样浓度会不会差很多？？...

可以啊，我只是给你举个例子，大概得体系。
你用10ul的话，那么相应的模板也要稍加加个1/5就可以了。
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16楼2014-08-18 15:38:40
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1158501537
17楼2015-03-31 22:03:36
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