| 查看: 2170 | 回复: 16 | |||
[求助]
融合PCR求经验指点 已有7人参与
|
|||
在做融合PCR，要将三个片段连接后一块全长PCR，这三个片段分别是1638bp，1565bp和317bp的，其中317bp要连在俩长片段中间。现在我已经分别将三片段做了PCR，并且胶回收了，也做了检测；之前由于小片段回收总出问题，所以胶回收后小片段电泳检测和长片段不在一块。下面分别是长片段和短片段电泳检测图，其中2-4号管都是1638bp的（因为回收时分了3管回收），5-6是1565bp的，点样时Marker用了2ul，样品都是用了6ul；小片段点样时Marker2ul，样品8ul；由于是第一次做不知道做全长PCR时三者的比例改以多少为宜，求高手，长辈指点一二，非常感谢！ UVP00853Aug102014_副本2.jpg  UVP00891Aug152014_副本.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有276人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助！新人，融合PCR一直融不上！！！
已经有24人回复
- 融合产物作为模板P不出来，求大神指点！！！
已经有9人回复
- 求大神指点qPCR结果，相对定量，动物给药后各个个体表达相差数量级，求助~~~~
已经有6人回复
- 融合PCR请帮忙看看图片吧
已经有6人回复
- 融合PCR详细步骤
已经有8人回复
- 菌液pcr总是做不出！求高手解答！
已经有18人回复
- 融合PCR最后一步做不出来，求救！！！
已经有23人回复
- 跪求大神指点PCR产物浓度分析
已经有12人回复
- 求高人指点qpcr问题，扩增效率太高！
已经有14人回复
- 无模板pcr合成短片段 一直失败
已经有44人回复
- 求镜下鉴定中成分缩写所代表的含义！
已经有7人回复
- PCR扩增融合基因
已经有21人回复
- 融合pcr引物设计
已经有14人回复
- 关于融合PCR的问题
已经有14人回复
- overlap PCR做不出来呐。。。。
已经有23人回复
- 做过用同源重组进行基因敲出的朋友请进，PCR做不出来！！
已经有16人回复
- 求高手指点：RT-PCR的引物设计
已经有18人回复
- 重叠PCR应该怎么做？
已经有9人回复
- PCR扩不出目的基因
已经有14人回复
- 融合pcr怎么总是不成功啊
已经有9人回复
- 【求助/交流】重叠PCR相关问题。
已经有8人回复
- 【分享】荧光定量PCR实验指南（一）
已经有20人回复
- 【求助/交流】从RNA到cDNA合成再到克隆PCR的实验技巧和操作细节问题若干，寻求解答
已经有12人回复
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-17 20:36:40
gyesang: 回帖置顶 2014-08-18 15:09:12
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-17 20:36:40
gyesang: 回帖置顶 2014-08-18 15:09:12
|
你可以这样试试： 1，50ulPCR回收后，1ul的上样量类似于你第一张图的泳道5 2，融合PCR时，50ul反应体系各加1ul 3，小片段因为比较短，加1ul也是可以的（按照等mol来算，有点多），也可适当减少点，为了做起来方便1ul也是可以的，先试试 4，如果三个片段长度都差不多，比较容易；所以，如果3个放一起，一次不能融合，最好，两端先融合，再第三段融合，模板用量都差不多 |
10楼2014-08-17 20:06:46
2楼2014-08-17 11:04:30
3楼2014-08-17 13:52:01
鬼羽帝魂
木虫 (著名写手)
- 应助: 183 (高中生)
- 金币: 3100.2
- 散金: 19
- 红花: 12
- 帖子: 1427
- 在线: 186.8小时
- 虫号: 2538789
- 注册: 2013-07-09
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
4楼2014-08-17 14:59:02
wangranjun
荣誉版主 (知名作家)
广庭之惘然
-
专家经验: +106 - 应助: 108 (高中生)
- 贵宾: 2.351
- 金币: 33457.9
- 散金: 3850
- 红花: 153
- 沙发: 8
- 帖子: 5316
- 在线: 1310.2小时
- 虫号: 2234819
- 注册: 2013-01-11
- 性别: GG
- 专业: 药物毒理
- 管辖: 文学芳草园
5楼2014-08-17 15:03:44
6楼2014-08-17 15:08:55
7楼2014-08-17 15:09:27
8楼2014-08-17 15:10:06
wangranjun
荣誉版主 (知名作家)
广庭之惘然
-
专家经验: +106 - 应助: 108 (高中生)
- 贵宾: 2.351
- 金币: 33457.9
- 散金: 3850
- 红花: 153
- 沙发: 8
- 帖子: 5316
- 在线: 1310.2小时
- 虫号: 2234819
- 注册: 2013-01-11
- 性别: GG
- 专业: 药物毒理
- 管辖: 文学芳草园
9楼2014-08-17 15:17:26
