24小时热门版块排行榜    

查看: 2429  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

漂流瓶1991

新虫 (小有名气)

[求助] 融合PCR求经验指点 已有7人参与

在做融合PCR,要将三个片段连接后一块全长PCR,这三个片段分别是1638bp,1565bp和317bp的,其中317bp要连在俩长片段中间。现在我已经分别将三片段做了PCR,并且胶回收了,也做了检测;之前由于小片段回收总出问题,所以胶回收后小片段电泳检测和长片段不在一块。下面分别是长片段和短片段电泳检测图,其中2-4号管都是1638bp的(因为回收时分了3管回收),5-6是1565bp的,点样时Marker用了2ul,样品都是用了6ul;小片段点样时Marker2ul,样品8ul;由于是第一次做不知道做全长PCR时三者的比例改以多少为宜,求高手,长辈指点一二,非常感谢!

融合PCR求经验指点
UVP00853Aug102014_副本2.jpg


融合PCR求经验指点-1
UVP00891Aug152014_副本.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

漂流瓶1991

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by nl2016 at 2014-08-17 13:52:01
回收3个片段后,分别测定3个片段的浓度,等量混合后做PCR就好了!

对的,就是要测定三者的浓度,但我是研一新生提前进入实验室,不知道怎么测定所获片段浓度,求指点!我本来想根据跑胶条带分别和Marker亮度作比较,然后根据比例添加,可是感觉我自己认定的比例不怎么合理。
6楼2014-08-17 15:08:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

漂流瓶1991

新虫 (小有名气)

第二张图片1和2号管都是317bp的电泳条带
2楼2014-08-17 11:04:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nl2016

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
回收3个片段后,分别测定3个片段的浓度,等量混合后做PCR就好了!
3楼2014-08-17 13:52:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
每一个大约几十ng就好了
4楼2014-08-17 14:59:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 4/200 2026-09-17 05:50 by k06BKNblrGRH
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 5/250 2026-09-17 05:14 by k06BKNblrGRH
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-17 05:02 by k06BKNblrGRH
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 3/150 2026-09-17 04:16 by k06BKNblrGRH
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-17 02:26 by Tql5LQhh5rLK
[公派出国] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 7/350 2026-09-17 02:14 by Tql5LQhh5rLK
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 8/400 2026-09-17 02:04 by Tql5LQhh5rLK
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-17 02:02 by Tql5LQhh5rLK
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 7/350 2026-09-17 02:02 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 7/350 2026-09-17 01:52 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-17 01:16 by Tql5LQhh5rLK
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 yaCh4X3wd045 2026-09-14 3/150 2026-09-16 20:39 by MHf40yA0Uhyb
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 5/250 2026-09-16 20:38 by MHf40yA0Uhyb
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-16 19:15 by rRvxEj3zorCy
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-16 07:12 by LH5NkK5Ud4bh
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 0pYnUiPDfdnk 2026-09-14 3/150 2026-09-16 06:51 by LH5NkK5Ud4bh
[找工作] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 3/150 2026-09-16 02:38 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:39 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:39 by CgyNCDVNhGVg
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:46 by C79jjtjAKjEn
信息提示
请填处理意见