24小时热门版块排行榜    

查看: 2345  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

漂流瓶1991

新虫 (小有名气)

[求助] 融合PCR求经验指点 已有7人参与

在做融合PCR,要将三个片段连接后一块全长PCR,这三个片段分别是1638bp,1565bp和317bp的,其中317bp要连在俩长片段中间。现在我已经分别将三片段做了PCR,并且胶回收了,也做了检测;之前由于小片段回收总出问题,所以胶回收后小片段电泳检测和长片段不在一块。下面分别是长片段和短片段电泳检测图,其中2-4号管都是1638bp的(因为回收时分了3管回收),5-6是1565bp的,点样时Marker用了2ul,样品都是用了6ul;小片段点样时Marker2ul,样品8ul;由于是第一次做不知道做全长PCR时三者的比例改以多少为宜,求高手,长辈指点一二,非常感谢!

融合PCR求经验指点
UVP00853Aug102014_副本2.jpg


融合PCR求经验指点-1
UVP00891Aug152014_副本.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

漂流瓶1991

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by nl2016 at 2014-08-17 13:52:01
回收3个片段后,分别测定3个片段的浓度,等量混合后做PCR就好了!

对的,就是要测定三者的浓度,但我是研一新生提前进入实验室,不知道怎么测定所获片段浓度,求指点!我本来想根据跑胶条带分别和Marker亮度作比较,然后根据比例添加,可是感觉我自己认定的比例不怎么合理。
6楼2014-08-17 15:08:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

漂流瓶1991

新虫 (小有名气)

第二张图片1和2号管都是317bp的电泳条带
2楼2014-08-17 11:04:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nl2016

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
回收3个片段后,分别测定3个片段的浓度,等量混合后做PCR就好了!
3楼2014-08-17 13:52:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
每一个大约几十ng就好了
4楼2014-08-17 14:59:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +10 Tide man 2026-08-11 10/500 2026-08-12 20:59 by 陈晨晨陈啊
[基金申请] filecode +13 documentary 2026-08-10 15/750 2026-08-12 15:56 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
信息提示
请填处理意见