24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2234  |  回复: 9

zhou325912

铜虫 (小有名气)

[求助] 融合产物作为模板P不出来,求大神指点!!! 已有2人参与

我做的是四个片段融合,首先PCR扩增出目的基因,然后将前两个基因和后两个基因分别融合,然后胶回收获得大小一致的融合片段,又将这两个融合片段融合在一起,跑胶验证片段大小是对的,然后胶回收,以最终的胶回收融合产物为模板PCR,P出来的大小应该是2700bp左右,可是P了几次总是在750bp左右,P不出来条带。分析不出来原因,有高人做过类似的吗?这个该如何解决啊~~~·
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smdsfy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhou325912: 金币+2 2014-05-29 12:17:47
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-05-29 13:00:56
overlapping PCR,把你最终胶回收的两个片段跑个胶,看一下浓度,摸索下两个的比例,还有你使用的引物,检查是否有问题?
2楼2014-05-28 15:35:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhou325912

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by smdsfy at 2014-05-28 15:35:47
overlapping PCR,把你最终胶回收的两个片段跑个胶,看一下浓度,摸索下两个的比例,还有你使用的引物,检查是否有问题?

我用nanodrop测了下浓度,一共回收了两管,一个30ng/ul左右,另一个十几ng,然后50ul体系都是加的1ul模板,最终都没有条带,是不是融合片段本身就不好P.还是里面的杂带太多了,还是其他原因?
3楼2014-05-28 18:30:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhou325912

铜虫 (小有名气)

有没有人啊,能不能帮忙分析一下啊~~~~!!!!!!!!
4楼2014-05-28 20:58:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smdsfy

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★
zhou325912(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-05-29 13:05:24
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhou325912 at 2014-05-28 18:30:35
我用nanodrop测了下浓度,一共回收了两管,一个30ng/ul左右,另一个十几ng,然后50ul体系都是加的1ul模板,最终都没有条带,是不是融合片段本身就不好P.还是里面的杂带太多了,还是其他原因?...

那个测得浓度不一定准,最好跑胶看一下,不要偷懒,试着把模板的量加大,一般PCR主要在于模板与引物,还有尽量使用高保真的酶,开始试的时候用小体系(如:10ul),至于镁浓度离子,如果有精力可以去摸索一下,意见仅供参考 啊!这个是不太好做,也可以去查考融合PCR相关的文献,多点耐心加细心吧,祝你成功!
5楼2014-05-29 09:56:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhou325912

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by smdsfy at 2014-05-29 09:56:12
那个测得浓度不一定准,最好跑胶看一下,不要偷懒,试着把模板的量加大,一般PCR主要在于模板与引物,还有尽量使用高保真的酶,开始试的时候用小体系(如:10ul),至于镁浓度离子,如果有精力可以去摸索一下,意见仅 ...

谢谢,正在努力中,还是先摸索着看看
6楼2014-05-29 12:18:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (初入文坛)

本帖仅楼主可见
7楼2016-10-18 11:34:35
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

缘虫彦

新虫 (初入文坛)

西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2018-07-24 21:38:12
我也是,跟你一样做融合pcr,4段融合,胶回收之后的产物再做2次pcr就没条带了,不过我的片段较长6k,你的解决了吗?求经验。
8楼2018-05-25 00:12:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

最亮的星lala

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 缘虫彦 at 2018-05-25 00:12:42
我也是,跟你一样做融合pcr,4段融合,胶回收之后的产物再做2次pcr就没条带了,不过我的片段较长6k,你的解决了吗?求经验。

请问你P出来了吗?求经验,我的片段长度7kb左右,四片段融合,用的primestar酶,以切胶回收产物为模板一直没扩出来。

发自小木虫Android客户端
9楼2018-07-24 20:24:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuyuzhi

新虫 (正式写手)

一道生物支持你
17343151072目前在一道生物,常联系
10楼2018-07-26 16:49:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhou325912 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿郑州大学材料与化工085600,求调剂 +26 吃的不少 2026-04-02 26/1300 2026-04-06 13:40 by BruceLiu320
[考研] 求调剂 +5 chenxrlkx 2026-04-05 7/350 2026-04-06 07:54 by houyaoxu
[考研] 一志愿北京化工085600 310分求调剂 +16 0856材料与化工3 2026-04-04 18/900 2026-04-06 01:54 by BruceLiu320
[考研] 308求调剂 +3 终不似从前 2026-04-05 3/150 2026-04-05 22:23 by hemengdong
[考研] 材料工程302分求调剂 +9 zyx上岸! 2026-04-04 9/450 2026-04-05 22:08 by 醉翁wl
[考研] 348求调剂 +6 wukira 2026-04-04 6/300 2026-04-05 18:11 by 猪会飞
[考研] 282求调剂 +3 aaa车辆 2026-04-01 3/150 2026-04-05 17:03 by yulian1987
[考研] 0832食品科学与工程学硕282调剂 +6 鱼在水中游a 2026-04-02 9/450 2026-04-05 11:45 by flysky1234
[考研] 085602调剂 初试总分335 +12 19123253302 2026-04-04 12/600 2026-04-05 08:08 by 544594351
[考研] 26考研调剂0710 0860 +9 补补不补 2026-04-03 14/700 2026-04-04 23:32 by 果冻大王
[考研] 0854求调剂 +4 assdll 2026-04-03 4/200 2026-04-04 22:17 by hemengdong
[考研] 0856调剂 +8 曲听筠 2026-03-30 8/400 2026-04-04 08:46 by tianyyysss
[考研] 求调剂,一志愿北京中医药大学 +3 小小达不溜 2026-04-02 3/150 2026-04-03 22:55 by 冲矢昴星团
[考研] 数二英二348求调剂 +4 hxdzj1 2026-04-03 5/250 2026-04-03 21:25 by zhq0425
[考研] 289-求调剂 +4 这里是_ 2026-04-03 4/200 2026-04-03 14:23 by 1753564080
[考研] 求材料调剂 一志愿南昌大学 328分 +5 yyy..... 2026-04-03 5/250 2026-04-03 13:46 by 百灵童888
[考研] 372分材料与化工(085600)一志愿湖南大学求调剂 +5 蓝笺片 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:37 by dongzh2009
[考研] 293求调剂 +4 珂珂乐 2026-04-02 4/200 2026-04-02 20:10 by 6781022
[考研] 土木304求调剂 +5 顶级擦擦 2026-03-31 5/250 2026-04-01 08:15 by fdcxdystjk¥
[考研] 一志愿大连理工大学,机械工程学硕,341 +3 西瓜田的守望者 2026-03-30 3/150 2026-03-31 11:08 by asdfzly
信息提示
请填处理意见