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zhou325912

铜虫 (小有名气)

[求助] 融合产物作为模板P不出来,求大神指点!!! 已有2人参与

我做的是四个片段融合,首先PCR扩增出目的基因,然后将前两个基因和后两个基因分别融合,然后胶回收获得大小一致的融合片段,又将这两个融合片段融合在一起,跑胶验证片段大小是对的,然后胶回收,以最终的胶回收融合产物为模板PCR,P出来的大小应该是2700bp左右,可是P了几次总是在750bp左右,P不出来条带。分析不出来原因,有高人做过类似的吗?这个该如何解决啊~~~·
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匿名

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7楼2016-10-18 11:34:35
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smdsfy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhou325912: 金币+2 2014-05-29 12:17:47
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-05-29 13:00:56
overlapping PCR,把你最终胶回收的两个片段跑个胶,看一下浓度,摸索下两个的比例,还有你使用的引物,检查是否有问题?
2楼2014-05-28 15:35:47
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zhou325912

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by smdsfy at 2014-05-28 15:35:47
overlapping PCR,把你最终胶回收的两个片段跑个胶,看一下浓度,摸索下两个的比例,还有你使用的引物,检查是否有问题?

我用nanodrop测了下浓度,一共回收了两管,一个30ng/ul左右,另一个十几ng,然后50ul体系都是加的1ul模板,最终都没有条带,是不是融合片段本身就不好P.还是里面的杂带太多了,还是其他原因?
3楼2014-05-28 18:30:35
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zhou325912

铜虫 (小有名气)

有没有人啊,能不能帮忙分析一下啊~~~~!!!!!!!!
4楼2014-05-28 20:58:04
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