应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » Overlapping PCR,扩增全长片段总是会少,这是什么情况？哪位大神能给我解答一下啊？
51/1返回列表
查看: 2500  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

koreyoshitan

金虫 (初入文坛)

[求助] Overlapping PCR,扩增全长片段总是会少,这是什么情况？哪位大神能给我解答一下啊？ 已有2人参与

我利用overlapping PCR扩增6.4kb的一个片段，设计了四段引物，每一段扩增都是正确的，两段连起来也是正常的，但四段都连接起来的时候就少800多bp,到底是什么原因啊？大神们帮我这个菜鸟解决一下吧！无限感谢！我的体系是模版各1ul ；buffer 2.5ul ;dNTP 2ul ;引物各1ul;水是16.25ul，HIFI酶是0.25ul
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-08-16 06:51:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

koreyoshitan

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by nl2016 at 2014-08-16 09:56:31
你先确定你“每一段扩增都是正确的，两段连起来也是正常的”，如果确定了，那你多挑几个克隆，应该会找到正确的！

已经挑过很多了，做了很多遍，换过RNA，有说是首尾引物的问题，可是扩全长头尾的引物也不能变啊？
赞一下 回复此楼
3楼2014-08-16 14:57:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

nl2016

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-08-16 15:54:55
koreyoshitan: 金币+5, ★有帮助 2014-08-17 20:44:12
你先确定你“每一段扩增都是正确的，两段连起来也是正常的”，如果确定了，那你多挑几个克隆，应该会找到正确的！
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-16 09:56:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wshi85

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
koreyoshitan: 金币+5, ★有帮助 2014-08-17 20:44:21
建议将两段长片段采用重组连接的方式进行拼接！
赞一下 回复此楼
很久没在虫虫上漂游了，觉得回归虫虫！
4楼2014-08-17 11:37:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

koreyoshitan

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wshi85 at 2014-08-17 11:37:33
建议将两段长片段采用重组连接的方式进行拼接！

您的意思是将两个片段用T4连接酶连接起来？中间有重复区就可以是吧？
赞一下 回复此楼
5楼2014-08-17 20:43:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 290求调剂 +6 @将就将就看 2026-03-10 11/550 2026-03-17 10:22 by @将就将就看
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] 0703化学336分求调剂 +3 zbzihdhd 2026-03-15 4/200 2026-03-16 23:52 by zbzihdhd
[基金申请] 国自科面上基金字体 +6 iwuli 2026-03-12 7/350 2026-03-16 21:18 by sculhf
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 材料与化工求调剂 +3 为学666 2026-03-16 3/150 2026-03-16 15:09 by 加号+
[考研] 材料与化工专硕调剂 +3 heming3743 2026-03-16 3/150 2026-03-16 15:05 by peike
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-15 6/300 2026-03-16 08:00 by wang_dand
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 一志愿湖师大化学289求调剂 +6 XMCMM3.14159 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:28 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +8 zchqwer 2026-03-10 8/400 2026-03-14 00:01 by JourneyLucky
[考研] 材料工程,326分，求调剂 +6 KRSLSR 2026-03-10 6/300 2026-03-13 23:47 by JourneyLucky
[考研] （081700）化学工程与技术-298分求调剂 +12 11啦啦啦 2026-03-11 35/1750 2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 求调剂 资源与环境 285 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:31 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭