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koreyoshitan

金虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 761
帖子: 26
在线: 10.7小时
虫号: 2736121
注册: 2013-10-19
性别: MM
专业: 肿瘤诊断

[求助] Overlapping PCR,扩增全长片段总是会少,这是什么情况？哪位大神能给我解答一下啊？已有2人参与

我利用overlapping PCR扩增6.4kb的一个片段，设计了四段引物，每一段扩增都是正确的，两段连起来也是正常的，但四段都连接起来的时候就少800多bp,到底是什么原因啊？大神们帮我这个菜鸟解决一下吧！无限感谢！我的体系是模版各1ul ；buffer 2.5ul ;dNTP 2ul ;引物各1ul;水是16.25ul，HIFI酶是0.25ul

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1楼2014-08-16 06:51:04

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nl2016

铁虫 (初入文坛)

应助: 8 (幼儿园)
金币: 71.5
红花: 1
帖子: 22
在线: 22.3小时
虫号: 3368255
注册: 2014-08-15
专业: 环境微生物学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-08-16 15:54:55
koreyoshitan: 金币+5, ★有帮助 2014-08-17 20:44:12

你先确定你“每一段扩增都是正确的，两段连起来也是正常的”，如果确定了，那你多挑几个克隆，应该会找到正确的！

2楼2014-08-16 09:56:31

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