24小时热门版块排行榜    

查看: 2498  |  回复: 6

koreyoshitan

金虫 (初入文坛)

[求助] Overlapping PCR,扩增全长片段总是会少,这是什么情况?哪位大神能给我解答一下啊? 已有2人参与

我利用overlapping PCR扩增6.4kb的一个片段,设计了四段引物,每一段扩增都是正确的,两段连起来也是正常的,但四段都连接起来的时候就少800多bp,到底是什么原因啊?大神们帮我这个菜鸟解决一下吧!无限感谢!我的体系是模版各1ul ;buffer 2.5ul ;dNTP 2ul ;引物各1ul;水是16.25ul,HIFI酶是0.25ul
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nl2016

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-08-16 15:54:55
koreyoshitan: 金币+5, 有帮助 2014-08-17 20:44:12
你先确定你“每一段扩增都是正确的,两段连起来也是正常的”,如果确定了,那你多挑几个克隆,应该会找到正确的!
2楼2014-08-16 09:56:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

koreyoshitan

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by nl2016 at 2014-08-16 09:56:31
你先确定你“每一段扩增都是正确的,两段连起来也是正常的”,如果确定了,那你多挑几个克隆,应该会找到正确的!

已经挑过很多了,做了很多遍,换过RNA,有说是首尾引物的问题,可是扩全长头尾的引物也不能变啊?
3楼2014-08-16 14:57:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wshi85

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
koreyoshitan: 金币+5, 有帮助 2014-08-17 20:44:21
建议将两段长片段采用重组连接的方式进行拼接!
很久没在虫虫上漂游了,觉得回归虫虫!
4楼2014-08-17 11:37:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

koreyoshitan

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wshi85 at 2014-08-17 11:37:33
建议将两段长片段采用重组连接的方式进行拼接!

您的意思是将两个片段用T4连接酶连接起来?中间有重复区就可以是吧?
5楼2014-08-17 20:43:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wshi85

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by koreyoshitan at 2014-08-17 20:43:52
您的意思是将两个片段用T4连接酶连接起来?中间有重复区就可以是吧?...

不,是采用重组酶!
很久没在虫虫上漂游了,觉得回归虫虫!
6楼2014-08-29 19:10:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

koreyoshitan

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by wshi85 at 2014-08-29 19:10:36
不,是采用重组酶!...

哦……
7楼2014-09-04 07:21:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 koreyoshitan 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +8 不知道叫什么! 2026-03-15 9/450 2026-03-16 07:45 by L135790
[文学芳草园] 伙伴们,祝我生日快乐吧 +15 myrtle 2026-03-10 24/1200 2026-03-15 21:16 by 苏州_逗号
[考博] 欢迎申博同学联系 +3 天道酬勤2026686 2026-03-10 7/350 2026-03-15 19:03 by 天道酬勤2026686
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 080500,材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化,一志愿:哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 求调剂 +5 鹤遨予卿 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:44 by JourneyLucky
[考研] 招收0805(材料)调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 0805,333求调剂 +3 112253525 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:42 by JourneyLucky
[考研] 285化工学硕求调剂(081700) +6 柴郡猫_ 2026-03-12 6/300 2026-03-13 20:46 by hmn_wj
[考研] 【考研调剂求收留】 +3 Ceciilia 2026-03-11 3/150 2026-03-13 20:18 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-12 5/250 2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 土木第一志愿276求调剂,科研和技能十分丰富,求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂! +3 不想理你 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:18 by JourneyLucky
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +4 ly3471z 2026-03-13 4/200 2026-03-13 13:00 by JourneyLucky
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-12 5/250 2026-03-13 10:56 by houyaoxu
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +4 薛云鹏 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:40 by 学员8dgXkO
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
[硕博家园] 木虫好像不热闹了,是不是? +4 偏振片 2026-03-10 4/200 2026-03-10 09:51 by longwave
[考研] 数二英二309分请求调剂 +3 dtdxzxx 2026-03-09 4/200 2026-03-09 19:56 by yuningshan
信息提示
请填处理意见