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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助---PCR电泳检测后胶回收为什么总洗没了？？
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漂流瓶1991

新虫 (小有名气)

[求助] 求助---PCR电泳检测后胶回收为什么总洗没了？？ 已有2人参与

最近回收一段317bp的小片段，PCR扩增电泳检测条带还挺好的，就做胶回收，使用的是E.Z.N.A Gel Extraction Kit 试剂盒，可是不知道为什么回收后电泳检测都没有条带，开始以为是洗脱液加的比较多，DNA浓度低，可是后来点样时加了18ul的量还是没有，检测时使用1%EB染色的胶。不知道哪里出问题了，都 做了好几次了，结果都是一样，其他大片段的回收后加5ul检测条带都很亮，就是这小片段回收总失败，求高人指点！！！！
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1楼 2014-08-13 20:44:43
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zhaodahe

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可能是你用的试剂盒不好用吧，问其他人借别的公司的试试。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-08-14 08:22:10
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gniy

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的胶是什么做的，TAE 还是TBE？ 可能TBE不适合回收。
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3楼2014-08-14 08:32:41
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漂流瓶1991

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaodahe at 2014-08-14 08:22:10
可能是你用的试剂盒不好用吧，问其他人借别的公司的试试。

嘿嘿，不是哦，昨天终于给回收成功了，感觉是量不足，很稀的问题，
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4楼2014-08-16 10:51:24
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漂流瓶1991

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gniy at 2014-08-14 08:32:41
你的胶是什么做的，TAE 还是TBE？ 可能TBE不适合回收。

TAE的，谢谢你哦，问题已解决
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5楼2014-08-16 10:52:04
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zttzhy1437

金虫 (正式写手)
最后是什么具体原因造成的呢？
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6楼2014-08-16 11:10:33
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yypyy

新虫 (初入文坛)
回收小片段（<500bp）时，溶胶后加些异丙醇会好些。
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7楼2014-08-25 14:53:36
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匿名

用户注销 (著名写手)
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8楼2014-08-27 22:35:38
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令狐少陈

铜虫 (小有名气)
我和你说哦，这是很正常的，胶回收后经常是看不到条带的，因为回收效率低，我研究过，基本所有KIT都一样。但是即使看不到条带，它还是存在的，你就放心酶切，放心继续做。不信？你拿回收产物PCR试试，肯定能P出很亮很亮的条带！
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多多交流，海纳百川
9楼2014-08-27 23:09:51
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