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weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于RACE实验的巢式 PCR扩增

各位老师,师兄师姐好。小虫最近在做RACE实验,之前已经拿到完整的ORF框,现在主要是为了获得两端序列。为什么nest PCR克隆到的片段和之前已测序的ORF总有个别碱基的差异,很是奇怪?难道是nest PCR出了问题,发生了碱基错配?还是由于第一轮PCR产物稀释的倍数不够,导致对nest PCR 有影响,使巢式PCR扩增收到啦影响?急切盼望知道,谢谢
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没有人生来洒脱,都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
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