| 查看: 3512 | 回复: 7 | |||
[求助]
质粒酶切条带问题 已有2人参与
|
|
质粒构建好之后没有做酶切鉴定，直接送去测序了，测序是正确的。可现在做双酶切时总是有些问题。如图： 1 marker 2 质粒 3BamH1单酶切 4Xhol单酶切 5 双酶切 BamH1酶切时大片段下面出现了两条带 xhol酶切时大片段上面还有一条条带，是没有切开的吗？ 双酶切时也出现了大片段下面的两条带。不知道这个是什么。 还有因为目的片段才200bp，所以前几次做酶切时总是看不到，是因为太小了吗？ 谢谢  2014-07-27酶切.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
拉坦前列腺素(Latanoprost)：前列腺素F2α衍生物如何成为青光眼一线用药
已经有0人回复
-
卟啉家族中的明星分子：MESO-四(3,5-二溴-4-羟基苯基)卟啉的性质与制备
已经有1人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有138人回复
-
宠物寄生虫防治：氟雷拉纳阻断GABA受体，持效12周驱杀跳蚤蜱虫
已经有0人回复
-
为呼吸打开通道：依伐卡托的科学之旅
已经有1人回复
-
Dordaviprone（ONC201）：小分子药物在中线胶质瘤中的应用
已经有0人回复
-
依喜替康：新型喜树碱衍生物的研究进展
已经有1人回复
-
膀胱癌靶向治疗新选择：厄达替尼作用机制与耐药研究进展
已经有0人回复
-
从水母到实验室：腔肠素的发现历程与生物发光奥秘
已经有1人回复
-
线粒体氧化磷酸化的新靶点：S-Gboxin的发现与研究进展
已经有0人回复
-
PROTAC药物开发选择VHL配体：MDK-7526以87%出口向量占有率成首选
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 质粒分别酶切均有正确条带，但双酶切只有一条条带，这是怎么回事？
已经有5人回复
- 单酶切跟双酶切电泳条带一样，且都比空质粒跑的快，什么原因？
已经有7人回复
- pet28a 空质粒双酶切图像问题
已经有15人回复
- Ecor Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切结果，目的条带有，可是另一条带比原来质粒还要大，怎么解释呢
已经有6人回复
- 酶切后跑出的条带这个样子，是酶的问题吗
已经有6人回复
- 求助：质粒酶切问题，质粒被切飞了啊！！
已经有24人回复
- 空质粒双酶切出现非常相近的两条带？转化长满板？
已经有23人回复
- 测序正确，但是酶切没有条带，而且重组质粒位置不对
已经有3人回复
- 双酶切后，质粒条带弥散
已经有13人回复
- PET28a重组质粒酶切后有三条？
已经有10人回复
- 质粒提取及酶切问题
已经有4人回复
- 求去掉环状质粒中酶切位点和切后的质粒连接问题？
已经有7人回复
- 提取重组质粒进行双酶切之后什么条带也没有，怎么回事？？
已经有7人回复
- 求助--双酶切连接构质粒
已经有15人回复
- 质粒酶切之后电泳呈弥散状是什么原因
已经有16人回复
- 我构建质粒后酶切验证的问题
已经有13人回复
- 双酶切后目的条带的疑问？
已经有8人回复
- 求助：重组质粒酶切问题！请大家帮我解决一下，急！
已经有7人回复
- 提取的质粒跑出四条或者五条带，但酶切后只有一条带，是不是我的质粒污染了
已经有18人回复
- 十万火急，重组质粒酶切只有一条带，测序有结果，但反复说我质粒浓度很低
已经有16人回复
- 双酶切没出现目的条带，呈弥散型，有图，求助。
已经有7人回复
- 质粒单酶切出现两条带
已经有18人回复
- 【求助/交流】质粒单酶切后竟然两条带
已经有32人回复
- 【求助/交流】求助、质粒酶切没有条带？
已经有18人回复
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
2楼2014-07-27 22:09:04
luwei13566
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 184 (高中生)
- 金币: 4352.9
- 散金: 97
- 红花: 35
- 帖子: 641
- 在线: 261.1小时
- 虫号: 2380655
- 注册: 2013-03-27
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-07-28 08:42:27
coffee159: 金币+4, ★★★很有帮助, 谢谢，因为当时是用重叠PCR的方法，通过pcr载体把目的基因插入的，所以没办法pcr验证。还有，最近提的质粒，大小8000bp,酶切后总是在15000作用有一条带，我不清楚这个是什么原因。质粒不纯的话测序能测出来吗？ 2014-07-28 09:36:07
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-07-28 08:42:27
coffee159: 金币+4, ★★★很有帮助, 谢谢，因为当时是用重叠PCR的方法，通过pcr载体把目的基因插入的，所以没办法pcr验证。还有，最近提的质粒，大小8000bp,酶切后总是在15000作用有一条带，我不清楚这个是什么原因。质粒不纯的话测序能测出来吗？ 2014-07-28 09:36:07
|
1.BamHI酶切应该是出现star活性了。你的基因才200bp，下面两条带肯定是切到载体上了，还有略微弥散，我记得这个酶稳定性不好。最好不要长时间切。 2.XhoI上面那个带和你的质粒对照应该是开环质粒无误。延长切割时间就消失掉了。 3.双酶切下面那两条带还是BamHI的star活性，至于你下面那个不亮很正常，因为首先你的基因不一定完全释放，可能一部分基因只是一端被切开，另一端还在载体上，就算你完全双酶切后基因和载体的摩尔比是1比1，但是你的载体远大于你的基因，嵌入的EB也远比你基因多。 4.酶切效果不好可以换PCR验证。 |
3楼2014-07-27 23:14:27
4楼2014-07-28 09:37:27
luwei13566
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 184 (高中生)
- 金币: 4352.9
- 散金: 97
- 红花: 35
- 帖子: 641
- 在线: 261.1小时
- 虫号: 2380655
- 注册: 2013-03-27
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
5楼2014-07-28 15:03:20
6楼2014-07-28 15:10:49
luwei13566
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 184 (高中生)
- 金币: 4352.9
- 散金: 97
- 红花: 35
- 帖子: 641
- 在线: 261.1小时
- 虫号: 2380655
- 注册: 2013-03-27
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
7楼2014-07-28 15:27:32
8楼2014-07-28 16:14:48
10