应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于重组质粒
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
61/1返回列表
查看: 927  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

胡琴HuQin

新虫 (小有名气)

[求助] 关于重组质粒 已有3人参与

最近实验遇到了瓶颈，小女子希望能在此得到各位大侠的指点！  
    我最近在做荧光定量RT-PCR方法的建立，需要以RNA为模版建立标准曲线。过程大致为：将扩增产物连接至pGEM-T载体上,构建pGEM-T/A2重组质粒,并进行测序鉴定。然后对重组质粒DNA进行体外转录,转录生成的RNA经过DNasel处理后作为定量用标准品。因为需要体外转录成RNA，所以重组质粒链接的片段需要是反向链接的才行，但是已经送6分重组质粒去测序了，全都是正向链接的！再这样测下去，什么时候是个头啊？请问各位高手，有木有什么办法改善一下这个情况呢？谢谢大家了~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-07-16 18:15:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

未婚

金虫 (正式写手)

分子小生

【答案】应助回帖

没动你在问什么呢？
赞一下 回复此楼
You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
2楼2014-07-20 20:29:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-07-21 08:29:23
胡琴HuQin: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-07-22 15:51:09
不就你帖子里面的其他内容提出过多的疑问，单就片段连pGEM-T后的方向问题，如果你想获得另外一个方向的重组质粒，你得把扩增产物重新连接到pGEM-T上，据我的经验，理论上片段连T载体后，两个方向的概率各50%，而实际上在一次实验的连接体系里面，大部分方向是一致的（一个板子上长出的克隆发现基本一致，个人经验，所以你不用再在同一个板子上挑克隆测序了），要想获得另外一个方向的，必须再做一次独立的连接和转化，然后看看是不是另外一个方向的（这也需要一定的运气）
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

胡琴HuQin
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2014-07-20 20:38:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡琴HuQin

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2014-07-20 20:38:40
不就你帖子里面的其他内容提出过多的疑问，单就片段连pGEM-T后的方向问题，如果你想获得另外一个方向的重组质粒，你得把扩增产物重新连接到pGEM-T上，据我的经验，理论上片段连T载体后，两个方向的概率各50%，而实际 ...

谢谢！我都挑了十多个菌测序，结果都是一样的！看来真的要像你说的方法来做做！
赞一下 回复此楼
4楼2014-07-22 15:50:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
4楼: Originally posted by 胡琴HuQin at 2014-07-22 15:50:41
谢谢！我都挑了十多个菌测序，结果都是一样的！看来真的要像你说的方法来做做！...

不客气！
回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2014-07-22 16:31:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

直接加酶切位点不就决定了可以是反向连接吗？
赞一下 回复此楼
你的日子如何，你的力量也必如何！
6楼2014-07-22 21:20:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 胡琴HuQin 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 321求调剂 +5 材料cailiao 2026-03-21 5/250 2026-03-26 20:41 by fmesaito
[考研] 291求调剂 +9 hhhhxn.. 2026-03-23 9/450 2026-03-26 18:59 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂 +7 18419759900 2026-03-25 7/350 2026-03-26 16:07 by 不吃魚的貓
[考研] 279 分 求调剂 +3 睡个好觉_16 2026-03-24 3/150 2026-03-26 15:43 by zzll406
[考研] 315分求调剂 +5 26考研上岸版26 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:11 by laoshidan
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 0854人工智能方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-24 4/200 2026-03-25 13:29 by 2177681040
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
[考研] 材料292调剂 +8 橘颂思美人 2026-03-23 8/400 2026-03-24 16:33 by laoshidan
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 070300，一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 315分，诚求调剂，材料与化工085600 +3 13756423260 2026-03-22 3/150 2026-03-22 20:11 by edmund7
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 261求B区调剂，科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭