应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于重组质粒
51/1返回列表
查看: 913  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

胡琴HuQin

新虫 (小有名气)

[求助] 关于重组质粒 已有3人参与

最近实验遇到了瓶颈，小女子希望能在此得到各位大侠的指点！  
    我最近在做荧光定量RT-PCR方法的建立，需要以RNA为模版建立标准曲线。过程大致为：将扩增产物连接至pGEM-T载体上,构建pGEM-T/A2重组质粒,并进行测序鉴定。然后对重组质粒DNA进行体外转录,转录生成的RNA经过DNasel处理后作为定量用标准品。因为需要体外转录成RNA，所以重组质粒链接的片段需要是反向链接的才行，但是已经送6分重组质粒去测序了，全都是正向链接的！再这样测下去，什么时候是个头啊？请问各位高手，有木有什么办法改善一下这个情况呢？谢谢大家了~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-07-16 18:15:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-07-21 08:29:23
胡琴HuQin: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-07-22 15:51:09
不就你帖子里面的其他内容提出过多的疑问，单就片段连pGEM-T后的方向问题，如果你想获得另外一个方向的重组质粒，你得把扩增产物重新连接到pGEM-T上，据我的经验，理论上片段连T载体后，两个方向的概率各50%，而实际上在一次实验的连接体系里面，大部分方向是一致的（一个板子上长出的克隆发现基本一致，个人经验，所以你不用再在同一个板子上挑克隆测序了），要想获得另外一个方向的，必须再做一次独立的连接和转化，然后看看是不是另外一个方向的（这也需要一定的运气）
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

胡琴HuQin
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2014-07-20 20:38:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

未婚

金虫 (正式写手)

分子小生

【答案】应助回帖

没动你在问什么呢？
赞一下 回复此楼
You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
2楼2014-07-20 20:29:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡琴HuQin

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2014-07-20 20:38:40
不就你帖子里面的其他内容提出过多的疑问，单就片段连pGEM-T后的方向问题，如果你想获得另外一个方向的重组质粒，你得把扩增产物重新连接到pGEM-T上，据我的经验，理论上片段连T载体后，两个方向的概率各50%，而实际 ...

谢谢！我都挑了十多个菌测序，结果都是一样的！看来真的要像你说的方法来做做！
赞一下 回复此楼
4楼2014-07-22 15:50:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
4楼: Originally posted by 胡琴HuQin at 2014-07-22 15:50:41
谢谢！我都挑了十多个菌测序，结果都是一样的！看来真的要像你说的方法来做做！...

不客气！
回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2014-07-22 16:31:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分，求调剂 +4 jiajunX 2026-03-22 4/200 2026-03-23 14:21 by xiaotangjing
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +8 材料学257求调剂 2026-03-23 9/450 2026-03-23 13:01 by ztnimte
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +3 allen-yin 2026-03-23 4/200 2026-03-23 12:27 by allen-yin
[考研] 石河子大学（211、双一流）硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 求调剂 +6 十三加油 2026-03-21 6/300 2026-03-22 17:00 by i_cooler
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 286求调剂 +10 Faune 2026-03-21 10/500 2026-03-21 23:34 by 314126402
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 278求调剂 +9 烟火先于春 2026-03-17 9/450 2026-03-21 17:47 by 学员8dgXkO
[考研] 311求调剂 +3 勇敢的小吴 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:40 by ColorlessPI
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 303求调剂 +5 睿08 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:11 by JourneyLucky
[考研] 二本跨考郑大材料306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:29 by JourneyLucky
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕英一数二306 +7 z1z2z3879 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:48 by JourneyLucky
[考研] 330求调剂 +4 小材化本科 2026-03-18 4/200 2026-03-20 23:13 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭