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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 重叠pcr连接不起来
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匿名

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1楼 2014-07-14 15:58:57
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Dylan苏木樨

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-14 18:23:11
gyesang: 应助指数+1 2014-07-15 10:06:19
第一步的退火温度做个梯度，第二步一般就不用梯度了，中间引物设计合适了一般不会有什么问题的
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2楼2014-07-14 16:43:59
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bolysu

禁虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-14 23:36:41
gyesang: 应助指数+1 2014-07-15 10:06:27
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3楼2014-07-14 19:19:53
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匿名

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4楼2014-07-14 19:30:21
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爱的天使13

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用的什么酶啊？我最近也在做，连的还好啊
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5楼2014-07-15 09:10:26
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匿名

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6楼2014-07-25 04:26:05
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匿名

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7楼2014-07-25 04:30:48
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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by pf790352975 at 2014-07-25 04:30:48
目前在4kb和2kb的两个片段 最终是连接成8kb的基因组，做了两次始终连接不上，第一步退火60度，第二步根据引物tm-5度退火。。。。第二次把第一步的退火温度降到50.求解答。

我的也是，连接不上，我的还比你的小多了，一个320bp，一个450bp,我的能看到条带，但是很弱，也有拖带，下面一百处有条杂带。我不太看得懂你的是什么PCR方法，我用的touch down，68-55，第一次13个循环，第二次20个循环。希望有解决方法或意见能告诉我一下，谢谢
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8楼2014-07-31 11:51:30
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