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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 有关重叠PCR的问题求指导，谢谢。。
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liulugang

木虫 (小有名气)

[求助] 有关重叠PCR的问题求指导，谢谢。。 已有2人参与

我想将一段400bp DNA片段与一段3500bp DNA连接，请问重叠pcr适合吗？有什么要注意的？文献上说做重叠pcr的两条片段需大小接近，我这种情况是不是不适合使用重叠pcr？
还望虫友指导下，谢谢啦！！！
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1楼 2014-04-09 09:17:55
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

liulugang

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-09 12:37:27
那么费劲干什么，直接In-Fusion就完事啦
...

您好，是In-Fusion试剂盒吗？这个没用过，还请指导下哈。
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5楼2014-04-09 12:50:30
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普通回帖

d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liulugang(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-04-09 14:11:58
liulugang: 金币+6, ★★★★★最佳答案 2014-04-09 20:34:06
可以的，我曾经做过4K与200bp的overlap，设计引物的时候注意点，在设置overlap引物的时候，假设A与B overlap，将A的反向引物设置到60bp，30bp是A上面的，30bp是B上的，B的正向引物是A的反向引物的反向互补序列，也就是最终的overlap区能达到60bp，不知道这样描述你懂了没？
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2楼2014-04-09 09:43:03
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信仰爱

铜虫 (小有名气)
可以的，我做过类似的。
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3楼2014-04-09 11:16:01
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liulugang: 金币+6, ★★★很有帮助 2014-04-09 20:34:32
引用回帖:
3楼: Originally posted by 信仰爱 at 2014-04-09 11:16:01
可以的，我做过类似的。

那么费劲干什么，直接In-Fusion就完事啦

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4楼2014-04-09 12:37:27
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liulugang

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-09 09:43:03
可以的，我曾经做过4K与200bp的overlap，设计引物的时候注意点，在设置overlap引物的时候，假设A与B overlap，将A的反向引物设置到60bp，30bp是A上面的，30bp是B上的，B的正向引物是A的反向引物的反向互补序列，也就 ...

懂的，谢谢了
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6楼2014-04-09 12:52:41
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liulugang

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 信仰爱 at 2014-04-09 11:16:01
可以的，我做过类似的。

谢谢了
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7楼2014-04-09 12:52:57
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
liulugang: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-04-09 20:34:41
引用回帖:
5楼: Originally posted by liulugang at 2014-04-09 12:50:30
您好，是In-Fusion试剂盒吗？这个没用过，还请指导下哈。...

clontech的试剂盒，有详细操作手册下载

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8楼2014-04-09 14:10:00
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liulugang

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-09 14:10:00
clontech的试剂盒，有详细操作手册下载
...

不好意思，还想请问下，in-fusion连接后，我的片段跑胶几乎对比不出来，如何验证是否连接成功？
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9楼2014-04-14 09:48:35
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Neo2000

木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by liulugang at 2014-04-14 09:48:35
不好意思，还想请问下，in-fusion连接后，我的片段跑胶几乎对比不出来，如何验证是否连接成功？...

你为什么要跑胶呢，直接做转化啊

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10楼2014-04-14 10:23:33
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