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liulugang

木虫 (小有名气)

[求助] 有关重叠PCR的问题求指导,谢谢。。 已有2人参与

我想将一段400bp DNA片段与一段3500bp DNA连接,请问重叠pcr适合吗?有什么要注意的?文献上说做重叠pcr的两条片段需大小接近,我这种情况是不是不适合使用重叠pcr?
还望虫友指导下,谢谢啦!!!
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liulugang

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-09 12:37:27
那么费劲干什么,直接In-Fusion就完事啦
...

您好,是In-Fusion试剂盒吗?这个没用过,还请指导下哈。
5楼2014-04-09 12:50:30
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普通回帖

d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
liulugang(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-04-09 14:11:58
liulugang: 金币+6, ★★★★★最佳答案 2014-04-09 20:34:06
可以的,我曾经做过4K与200bp的overlap,设计引物的时候注意点,在设置overlap引物的时候,假设A与B overlap,将A的反向引物设置到60bp,30bp是A上面的,30bp是B上的,B的正向引物是A的反向引物的反向互补序列,也就是最终的overlap区能达到60bp,不知道这样描述你懂了没?
2楼2014-04-09 09:43:03
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信仰爱

铜虫 (小有名气)

可以的,我做过类似的。
3楼2014-04-09 11:16:01
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
liulugang: 金币+6, ★★★很有帮助 2014-04-09 20:34:32
引用回帖:
3楼: Originally posted by 信仰爱 at 2014-04-09 11:16:01
可以的,我做过类似的。

那么费劲干什么,直接In-Fusion就完事啦

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-04-09 12:37:27
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liulugang

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-09 09:43:03
可以的,我曾经做过4K与200bp的overlap,设计引物的时候注意点,在设置overlap引物的时候,假设A与B overlap,将A的反向引物设置到60bp,30bp是A上面的,30bp是B上的,B的正向引物是A的反向引物的反向互补序列,也就 ...

懂的,谢谢了
6楼2014-04-09 12:52:41
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liulugang

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 信仰爱 at 2014-04-09 11:16:01
可以的,我做过类似的。

谢谢了
7楼2014-04-09 12:52:57
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


liulugang: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-04-09 20:34:41
引用回帖:
5楼: Originally posted by liulugang at 2014-04-09 12:50:30
您好,是In-Fusion试剂盒吗?这个没用过,还请指导下哈。...

clontech的试剂盒,有详细操作手册下载

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2014-04-09 14:10:00
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liulugang

木虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-09 14:10:00
clontech的试剂盒,有详细操作手册下载
...

不好意思,还想请问下,in-fusion连接后,我的片段跑胶几乎对比不出来,如何验证是否连接成功?
9楼2014-04-14 09:48:35
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Neo2000

木虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by liulugang at 2014-04-14 09:48:35
不好意思,还想请问下,in-fusion连接后,我的片段跑胶几乎对比不出来,如何验证是否连接成功?...

你为什么要跑胶呢,直接做转化啊

[ 发自小木虫客户端 ]
10楼2014-04-14 10:23:33
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