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匿名

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泡菜肉丝

新虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by pf790352975 at 2014-07-25 04:30:48
目前在4kb和2kb的两个片段 最终是连接成8kb的基因组,做了两次始终连接不上,第一步退火60度,第二步根据引物tm-5度退火。。。。第二次把第一步的退火温度降到50.求解答。

我的也是,连接不上,我的还比你的小多了,一个320bp,一个450bp,我的能看到条带,但是很弱,也有拖带,下面一百处有条杂带。我不太看得懂你的是什么PCR方法,我用的touch down,68-55,第一次13个循环,第二次20个循环。希望有解决方法或意见能告诉我一下,谢谢
8楼2014-07-31 11:51:30
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Dylan苏木樨

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-14 18:23:11
gyesang: 应助指数+1 2014-07-15 10:06:19
第一步的退火温度做个梯度,第二步一般就不用梯度了,中间引物设计合适了一般不会有什么问题的
2楼2014-07-14 16:43:59
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bolysu

禁虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-14 23:36:41
gyesang: 应助指数+1 2014-07-15 10:06:27
本帖内容被屏蔽

3楼2014-07-14 19:19:53
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匿名

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4楼2014-07-14 19:30:21
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