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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 把两段基因片段连接起来应该用什么技术？
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erryzhen

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【分子生物】EPI帖

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1楼 2011-05-20 11:14:45
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★
amisking(金币+1): 鼓励应助 2011-05-20 22:01:17
只需要将两端基因的引物设计出来，然后P出来，连接即可，在设计引物的时候，必须将两个基因的某一段酶切位点设计成一致就可以。
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2楼2011-05-20 12:17:16
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erryzhen

禁虫 (小有名气)
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3楼2011-05-20 15:02:34
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

SOE技术可以的，去查查看看原理就知道怎么做了。
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4楼2011-05-20 15:18:44
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475502411

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

在两个目的基因相连的引物的一端加上相同的酶切位点，然后根据酶切位点，选择适当的酶切条件酶切，酶切后分别回收酶切产物，在适当条件连接，一般是16度过夜
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
5楼2011-05-20 15:34:38
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 一并奖励 2011-05-20 16:12:40
erryzhen(金币+5): 2011-05-21 22:50:17
引用回帖:
Originally posted by erryzhen at 2011-05-20 15:02:34:
能说具体一点吗？谢谢！

比如你要将AB两个片段连接起来，首先呢各自设计AB两个基因的引物，在給引物加酶切位点的时候需要使得A基因的右端的酶切位点和B基因左端的酶切位点一致（假设是A--B，反之亦然），这样等引物设计完成之后并合成回来之后，PCR出来之后，酶切，然后纯化，进行连接就可以了。。。。

不知道我这样说你清楚了吗？

如果不清楚，那么说明你分子的知识看的还是不够，那么翻书吧。。。
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6楼2011-05-20 15:55:33
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shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

重叠PCR把，设计互补带互补序列的引物得到两个片段，然后延伸
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7楼2011-05-20 20:34:58
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