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nnsulei

金虫 (正式写手)

[交流] 5--6KB的基因片段多长时间扩增?用什么样的酶好呢?已有13人参与

5--6KB的基因片段多长时间扩增?用什么样的酶好呢?
LA Taq可以吗?要多长时间呢。图个便宜呗哈哈~~~
谢谢各位,问题解决了!片段太长,以基因组为模板总是弥散带,干脆最后就分段P了。呵呵

[ Last edited by nnsulei on 2011-8-22 at 14:08 ]
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努力做就有结果~
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liukgg

木虫 (小有名气)

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dhd997(金币+2): good 2011-08-19 12:01:58
一般来说普通Taq酶扩增速度是每分钟1kb,高保真Taq酶是每分钟750个碱基左右
山水凤凰
2楼2011-08-19 11:31:15
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w2boluo

金虫 (小有名气)

kod-plus,3min
How about the future?
3楼2011-08-19 11:34:04
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

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1949stone(金币+3): 可以考虑 2011-08-19 13:19:11
Taq plus 吧。。。是taq酶和PFU酶的混合物,保真性比较高一点。
扩增那么长的话,延伸时间5min吧。。。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-08-19 12:15:02
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

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西瓜(金币+2): 有道理啊 2011-08-19 18:44:26
这么长的片段不太好扩,即使扩出来也未必会全部正确;所以建议你分段扩,各段都正确后再拼接
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
5楼2011-08-19 14:28:50
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shizishanshang

至尊木虫 (职业作家)

LA TAQ ,5min
6楼2011-08-19 15:01:05
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zgb1982

木虫 (正式写手)

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西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-08-19 18:44:35
建议分段扩,再拼接虽然觉得麻烦,但说不定会更省时间
7楼2011-08-19 15:24:59
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xbl3688

银虫 (正式写手)

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西瓜(金币+3): Good 2011-08-20 22:24:52
至于酶和延伸时间推荐四楼的,这么长片段扩的话出现突变的几率是要大一点,几个人回复中推荐说要分段扩,那么能不能培养含有这个片段的原载体的菌,然后抽质粒。从抽到的质粒上酶切得到产物,也可以保证碱基序列的准确性呀。
生活的乐趣在于善于发现美,学会欣赏美
8楼2011-08-20 13:24:26
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

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西瓜(金币+1): 鼓励分享经验 2011-08-20 22:25:50
NEB公司的Phusion超保真酶,2kb/m,曾经扩过5kb的片段,一个碱基都没错。
9楼2011-08-20 15:01:16
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nnsulei

金虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by xbl3688 at 2011-08-20 13:24:26:
至于酶和延伸时间推荐四楼的,这么长片段扩的话出现突变的几率是要大一点,几个人回复中推荐说要分段扩,那么能不能培养含有这个片段的原载体的菌,然后抽质粒。从抽到的质粒上酶切得到产物,也可以保证碱基序列的 ...

是从基因组DNA中扩增。
努力做就有结果~
10楼2011-08-20 16:01:49
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