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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 5--6KB的基因片段多长时间扩增？用什么样的酶好呢？
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nnsulei

金虫 (正式写手)

[交流] 5--6KB的基因片段多长时间扩增？用什么样的酶好呢？ 已有13人参与

5--6KB的基因片段多长时间扩增？用什么样的酶好呢？
LA Taq可以吗?要多长时间呢。图个便宜呗哈哈～～～
谢谢各位，问题解决了！片段太长，以基因组为模板总是弥散带，干脆最后就分段P了。呵呵

[ Last edited by nnsulei on 2011-8-22 at 14:08 ]
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努力做就有结果～
1楼 2011-08-19 11:11:03
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liukgg

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
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dhd997(金币+2): good 2011-08-19 12:01:58
一般来说普通Taq酶扩增速度是每分钟1kb，高保真Taq酶是每分钟750个碱基左右
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山水凤凰
2楼2011-08-19 11:31:15
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w2boluo

金虫 (小有名气)
kod-plus,3min
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How about the future？
3楼2011-08-19 11:34:04
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★ ★
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1949stone(金币+3): 可以考虑 2011-08-19 13:19:11
Taq plus 吧。。。是taq酶和PFU酶的混合物，保真性比较高一点。
扩增那么长的话，延伸时间5min吧。。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-08-19 12:15:02
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
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西瓜(金币+2): 有道理啊 2011-08-19 18:44:26
这么长的片段不太好扩，即使扩出来也未必会全部正确；所以建议你分段扩，各段都正确后再拼接
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
5楼2011-08-19 14:28:50
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shizishanshang

至尊木虫 (职业作家)
LA TAQ ，5min
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6楼2011-08-19 15:01:05
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zgb1982

木虫 (正式写手)
★ ★
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西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-08-19 18:44:35
建议分段扩，再拼接虽然觉得麻烦，但说不定会更省时间
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7楼2011-08-19 15:24:59
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xbl3688

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+3): Good 2011-08-20 22:24:52
至于酶和延伸时间推荐四楼的，这么长片段扩的话出现突变的几率是要大一点，几个人回复中推荐说要分段扩，那么能不能培养含有这个片段的原载体的菌，然后抽质粒。从抽到的质粒上酶切得到产物，也可以保证碱基序列的准确性呀。
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生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
8楼2011-08-20 13:24:26
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
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西瓜(金币+1): 鼓励分享经验 2011-08-20 22:25:50
NEB公司的Phusion超保真酶,2kb/m,曾经扩过5kb的片段，一个碱基都没错。
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9楼2011-08-20 15:01:16
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nnsulei

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xbl3688 at 2011-08-20 13:24:26:
至于酶和延伸时间推荐四楼的，这么长片段扩的话出现突变的几率是要大一点，几个人回复中推荐说要分段扩，那么能不能培养含有这个片段的原载体的菌，然后抽质粒。从抽到的质粒上酶切得到产物，也可以保证碱基序列的 ...

是从基因组DNA中扩增。
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努力做就有结果～
10楼2011-08-20 16:01:49
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