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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 30金 咨询RACE 引物是否正反向有问题
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liuhaieres

铜虫 (小有名气)

[求助] 30金 咨询RACE 引物是否正反向有问题 已有3人参与

最近本人准备做race 扩全长实验  已经被搞得头晕眼花    同学说引物方向有问题  应该把5端改成正向 3端改成反向   现求助大神帮我看看 到底应该怎么样 甚是感激 ！！！
已知的中间序列：ttCCATTAACTTGTAAGCTAGTTTtACcAtCTCTTGAGCATATTCTTGGCATGCCTCCCT
TATCTCAGGCGGGTATTCAGGCCACTGATTAATCCACTCTGTCACCTCCTTGTCATCAGG
CTCATGGgAAGCCGGGATGAAGGTGGGTTCCTCTATaGTAAAATCAAAAaCCtCcTTCCA
GTCCcTtACGTTTTtGGTGTGCTCAGTTTCGTAGTAACCCAACACCTCCTTATCATTCCT
TCTGACCTTCCTCTTGTCCTCTAAACTCTGTGCAAAGAacTTCCTCGCTGCAGCCTCAAT
CCTCTGGCGCTtCTCCAAGGgCACCCcGTGgTtGATCACCTGGAAGAACCCCCATTCCTT
GCATGCTTTGCGTATCTCGCTAACAAGGCCTTCAACGGCAGAAACATCGCCGGAGGAGAG
TATAGGAgAAaGATCAATCAACGGGATGCCTTCGGCTTCGGtGAATAcGATTCTGGGTCT
GTGTTCAGGGTCTTGGAAGAAAGCTGGATCAACcTCTCCcATAGTTGGTg
设计的引物是：
名称        引物                                                   退火温度                             序列位置
3GSP1        GAAGAACCCCCATTCCTTGC                65                  343-362
3GSP2        TCTGGGTCTGTGTTCAGGGTCTTG        69                   472-495
5GSP1        GTTACTACGAAACTGAGCACACCAA        65                   218-194
5GSP2        ATGCCAAGAATATGCTCAAGAGA        64                    52-30
另外 原先准备是用takara的RACE 试剂盒 所以是根据里面的通用引物设计的特异性引物   后来又是准备用clontech的试剂盒 不知道通用引物不一样 会不会影响很大的！ 谢谢！！
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1楼 2014-07-14 13:26:59
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512102979

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

3'设计引物是sense,5'是antisense
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3楼2014-07-25 10:44:49
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liuhaieres

铜虫 (小有名气)
肿么木人理我。。。自己顶一下 伤心哈
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2楼2014-07-16 14:46:53
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匿名

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4楼2014-08-11 22:19:38
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匿名

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5楼2014-08-11 22:20:26
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