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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 扩未知基因，3“用B26，和B25不知道怎么全是反向引物单引物扩增
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赵建雪

银虫 (正式写手)

[求助] 扩未知基因，3“用B26，和B25不知道怎么全是反向引物单引物扩增 已有2人参与

扩未知基因，3”端，用正向引物和B26做一轮PCR,然后用其产物做模板，另一正向引物和B25扩增，为什么所得的片段一直是反向单引物扩增
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自己的路只有自己能负责
1楼 2013-12-20 21:42:47
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通缉要饭

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
B25和B26是什么？
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2楼2013-12-21 18:00:24
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赵建雪

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 通缉要饭 at 2013-12-21 18:00:24
B25和B26是什么？

用来扩增尾的引物，B26末尾有一大串B26  gactcgagtcgacatcgattttttttttttttttttB25 GACTCGAGTCGACATCGAT
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自己的路只有自己能负责
3楼2013-12-22 20:20:43
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通缉要饭

金虫 (著名写手)
其实我不大理解你的问题，你是用什么试剂盒的啊？
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4楼2013-12-22 20:25:26
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通缉要饭

金虫 (著名写手)
race一般就跑一次PCR即可呀……好像是用试剂盒里的一个引物和自己设计的一个引物……
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5楼2013-12-22 20:27:08
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赵建雪

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 通缉要饭 at 2013-12-22 20:25:26
其实我不大理解你的问题，你是用什么试剂盒的啊？

没有用试剂盒，
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自己的路只有自己能负责
6楼2013-12-27 22:29:00
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赵建雪

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 通缉要饭 at 2013-12-22 20:27:08
race一般就跑一次PCR即可呀……好像是用试剂盒里的一个引物和自己设计的一个引物……

如果不用试剂盒，不行吗
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自己的路只有自己能负责
7楼2013-12-27 22:32:13
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通缉要饭

金虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 赵建雪 at 2013-12-27 22:32:13
如果不用试剂盒，不行吗...

不用试剂盒我还真的不知道怎么做……
还是用试剂盒吧，效率高啊…
引物设计的好，运气好的话，几天就搞定了…
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8楼2013-12-27 22:49:06
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果树研究生

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我做RACE，5'和3'都没用试剂盒，都能做出来，看了你的B25和B26引物，跟我的一样，自己检查一下你设计的特异引物吧，第一轮PCR产物要稀释50倍作为第二轮PCR的模板；另外提RNA的质量最好高一点。跑个电泳看看。
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9楼2014-03-13 16:08:10
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15103323277

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 果树研究生 at 2014-03-13 16:08:10
我做RACE，5'和3'都没用试剂盒，都能做出来，看了你的B25和B26引物，跟我的一样，自己检查一下你设计的特异引物吧，第一轮PCR产物要稀释50倍作为第二轮PCR的模板；另外提RNA的质量最好高一点。跑个电泳看看。

我现在也是这样的问题，扩出来都是一条引物。是第二轮扩增后 胶回收筛选单克隆吗
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10楼2017-07-17 19:13:29
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