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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 扩未知基因，3“用B26，和B25不知道怎么全是反向引物单引物扩增
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赵建雪

银虫 (正式写手)

[求助] 扩未知基因，3“用B26，和B25不知道怎么全是反向引物单引物扩增 已有2人参与

扩未知基因，3”端，用正向引物和B26做一轮PCR,然后用其产物做模板，另一正向引物和B25扩增，为什么所得的片段一直是反向单引物扩增
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自己的路只有自己能负责
1楼 2013-12-20 21:42:47
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果树研究生

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我做RACE，5'和3'都没用试剂盒，都能做出来，看了你的B25和B26引物，跟我的一样，自己检查一下你设计的特异引物吧，第一轮PCR产物要稀释50倍作为第二轮PCR的模板；另外提RNA的质量最好高一点。跑个电泳看看。
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9楼2014-03-13 16:08:10
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通缉要饭

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
B25和B26是什么？
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2楼2013-12-21 18:00:24
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赵建雪

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 通缉要饭 at 2013-12-21 18:00:24
B25和B26是什么？

用来扩增尾的引物，B26末尾有一大串B26  gactcgagtcgacatcgattttttttttttttttttB25 GACTCGAGTCGACATCGAT
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自己的路只有自己能负责
3楼2013-12-22 20:20:43
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通缉要饭

金虫 (著名写手)
其实我不大理解你的问题，你是用什么试剂盒的啊？
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4楼2013-12-22 20:25:26
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