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[求助]
30金 咨询RACE 引物是否正反向有问题 已有3人参与
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最近本人准备做race 扩全长实验 已经被搞得头晕眼花 同学说引物方向有问题 应该把5端改成正向 3端改成反向 现求助大神帮我看看 到底应该怎么样 甚是感激 ！！！ 已知的中间序列：ttCCATTAACTTGTAAGCTAGTTTtACcAtCTCTTGAGCATATTCTTGGCATGCCTCCCT TATCTCAGGCGGGTATTCAGGCCACTGATTAATCCACTCTGTCACCTCCTTGTCATCAGG CTCATGGgAAGCCGGGATGAAGGTGGGTTCCTCTATaGTAAAATCAAAAaCCtCcTTCCA GTCCcTtACGTTTTtGGTGTGCTCAGTTTCGTAGTAACCCAACACCTCCTTATCATTCCT TCTGACCTTCCTCTTGTCCTCTAAACTCTGTGCAAAGAacTTCCTCGCTGCAGCCTCAAT CCTCTGGCGCTtCTCCAAGGgCACCCcGTGgTtGATCACCTGGAAGAACCCCCATTCCTT GCATGCTTTGCGTATCTCGCTAACAAGGCCTTCAACGGCAGAAACATCGCCGGAGGAGAG TATAGGAgAAaGATCAATCAACGGGATGCCTTCGGCTTCGGtGAATAcGATTCTGGGTCT GTGTTCAGGGTCTTGGAAGAAAGCTGGATCAACcTCTCCcATAGTTGGTg 设计的引物是： 名称 引物 退火温度 序列位置 3GSP1 GAAGAACCCCCATTCCTTGC 65 343-362 3GSP2 TCTGGGTCTGTGTTCAGGGTCTTG 69 472-495 5GSP1 GTTACTACGAAACTGAGCACACCAA 65 218-194 5GSP2 ATGCCAAGAATATGCTCAAGAGA 64 52-30 另外 原先准备是用takara的RACE 试剂盒 所以是根据里面的通用引物设计的特异性引物 后来又是准备用clontech的试剂盒 不知道通用引物不一样 会不会影响很大的！ 谢谢！！ |
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