| 查看: 2526 | 回复: 8 | ||||
[求助]
pgex 4t-1载体 无须诱导 已有1人参与
|
|
1、我想从产朊假丝酵母菌中扩增出尿酸酶的基因 但是查genenbank中没有产朊假丝酵母菌来源的尿酸酶mRNA只有DNA 看一些文献设计的引物是按照DNA设计的 是不是在做PCR的过程中省去逆转录的步骤 直接扩增呢 2、设计引物时目的基因的5'端都是以ATG开头的 在目的基因的两端加入酶切位点是在设计好的引物基础上加4-6碱基作为酶切位点还是在5'端改几个碱基使之成为酶切位点？ 3、两个目的基因连接 之间要加入一个酶切位点 我知道不能加目的基因、载体中存在的 但是不存在的酶切位点还有很多 我该怎么选择？ 4、将PGEX 4T-1改造成无需诱导即可表达目的基因的载体 是删除其中的lacIq吗？如何删除？删除后如何将载体重新连接起来呢？ 求大神指导 |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有294人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有2人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 有关原核表达载体构建方面的问题
已经有10人回复
- pet28和pet21表达的蛋白对于蛋白结晶的区别
已经有8人回复
- pET-28a与pGEX-4T-1表达蛋白的区别
已经有10人回复
- 关于原核表达载体构建，跪求~~~~
已经有12人回复
- PGEX-4T-1载体表达产物，GST标签的切除
已经有15人回复
- 原核表达载体构建- 遇到的一些问题···
已经有5人回复
- 原核表达重组表达载体的连问题
已经有14人回复
- 原核表达载体蛋白诱导
已经有18人回复
- IPTG诱导表达的问题
已经有12人回复
- 原核表达载体的构建
已经有37人回复
- 构建了个基因的表达载体，发现有一个氨基酸发生突变
已经有10人回复
- 原核表达pGEX-4T-1载体构建后，菌液pcr用什么引物
已经有12人回复
- 原核表达 PET-30载体 目的蛋白分子量偏小？
已经有18人回复
- T7载体的IPTG诱导
已经有10人回复
- GST标签 pGEX
已经有7人回复
- 原核表达蛋白诱导不出来
已经有16人回复
- 【求助/交流】十万火急，IPTG诱导是怎么回事，给我说个大概
已经有9人回复
- 【求助/交流】pGEX-4T-1质粒的抗性是什么？
已经有9人回复
- 【求助/交流】原核表达载体pGEX-4T-1对应的表达菌株
已经有6人回复
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
2楼2014-07-16 15:00:36
3楼2014-07-17 18:14:21
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
4楼2014-07-18 15:17:04
5楼2014-07-19 10:00:20
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
6楼2014-07-19 16:36:35
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-21 08:32:26
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-21 08:32:26
|
先下载这个载体的序列和图谱，比如addgenel里面就有，见http://www.addgene.org/vector-database/2876/  注释里面的ORF frame 3 3441 4400就是编码lacI的序列 |
7楼2014-07-19 16:41:40
8楼2014-07-20 10:21:00
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
9楼2014-07-20 20:29:05
