应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pgex 4t-1载体 无须诱导
51/1返回列表
查看: 2530  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

贝努努哈哈

铜虫 (小有名气)

[求助] pgex 4t-1载体 无须诱导 已有1人参与

1、我想从产朊假丝酵母菌中扩增出尿酸酶的基因 但是查genenbank中没有产朊假丝酵母菌来源的尿酸酶mRNA只有DNA 看一些文献设计的引物是按照DNA设计的 是不是在做PCR的过程中省去逆转录的步骤 直接扩增呢
2、设计引物时目的基因的5'端都是以ATG开头的 在目的基因的两端加入酶切位点是在设计好的引物基础上加4-6碱基作为酶切位点还是在5'端改几个碱基使之成为酶切位点？
3、两个目的基因连接 之间要加入一个酶切位点 我知道不能加目的基因、载体中存在的 但是不存在的酶切位点还有很多 我该怎么选择？
4、将PGEX 4T-1改造成无需诱导即可表达目的基因的载体 是删除其中的lacIq吗？如何删除？删除后如何将载体重新连接起来呢？
求大神指导
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-07-08 23:15:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
3楼: Originally posted by 贝努努哈哈 at 2014-07-17 18:14:21
这个是不是有两个启动子 要都去掉吗

201405080030351881.gif
...

你说的是哪两个启动子，说的清楚一点哈
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2014-07-18 15:17:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-07-21 08:29:57
1. 这个基因很可能没有内含子，如果没有内含子完全可以从基因组中扩增获得

2. 基因特异引物设计好后，加酶切位点，而不是改动碱基使之成为酶切位点

3. 可以通过Overlap PCR将两个目的基因连接在一起

4. 也可以将pLac启动子后面的LacO序列删掉即可
赞一下(1人) 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-07-16 15:00:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贝努努哈哈

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-07-16 15:00:36
1. 这个基因很可能没有内含子，如果没有内含子完全可以从基因组中扩增获得

2. 基因特异引物设计好后，加酶切位点，而不是改动碱基使之成为酶切位点

3. 可以通过Overlap PCR将两个目的基因连接在一起

4. 也 ...

这个是不是有两个启动子 要都去掉吗
pgex 4t-1载体 无须诱导
201405080030351881.gif
赞一下 回复此楼
3楼2014-07-17 18:14:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贝努努哈哈

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2014-07-18 15:17:04
你说的是哪两个启动子，说的清楚一点哈...

对不起 我看错了 如果删除laclq的话 怎么在整个序列中找到这段序列呢 有没有什么软件分析的 求指导
赞一下 回复此楼
5楼2014-07-19 10:00:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +3 白云123456789 2026-04-13 3/150 2026-04-15 12:42 by 西北望—风沙
[考研] 291求调剂 +4 关忆北. 2026-04-14 4/200 2026-04-15 10:49 by shenshen207
[考研] 求调剂 +9 小聂爱学习 2026-04-11 13/650 2026-04-14 19:18 by Art1977
[考研] 335求调剂 +19 想上岸呀！！ 2026-04-12 21/1050 2026-04-14 16:23 by Art1977
[考研] 105500药学求调剂 +4 x_skys 2026-04-12 4/200 2026-04-14 13:37 by rndfc
[考研] 人工智能320调剂08工类还有机会吗 +18 振—TZ 2026-04-10 19/950 2026-04-14 10:34 by screening
[考研] 农学0904 312求调剂 +4 Say Never 2026-04-11 4/200 2026-04-14 09:10 by zs92450
[考研] 2026硕士调剂_能动_河南农业大学 +4 河南农业大学-能 2026-04-12 4/200 2026-04-13 22:01 by bljnqdcc
[考研] 考研二轮调剂 +10 故人?? 2026-04-09 10/500 2026-04-13 09:55 by szhize
[考研] 一志愿0807 数一英一 313 有没有二轮调剂 +12 emokidd 2026-04-08 13/650 2026-04-13 08:32 by lhj2009
[考研] 322求调剂 +6 123安康 2026-04-12 13/650 2026-04-12 15:51 by 123安康
[考研] 电气专硕320求调剂 +6 小麻子111 2026-04-10 6/300 2026-04-12 10:54 by lemon6009
[考研] 一志愿郑州大学 22408 305分求调剂 +5 安小满zzz 2026-04-08 5/250 2026-04-12 00:41 by 蓝云思雨
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +16 叶zilin 2026-04-10 16/800 2026-04-11 11:04 by may_新宇
[考研] 机械专硕270求调剂，接受跨专业 +12 老师看看我吧aba 2026-04-09 14/700 2026-04-11 10:21 by laoshidan
[考研] 调剂 化学 307 +21 73372112 2026-04-09 23/1150 2026-04-10 23:53 by wj165256
[考研] 调剂 +12 卷卷卷心菜_ 2026-04-09 13/650 2026-04-10 22:36 by Ftglcn90
[考研] 调剂 +19 小张ZA 2026-04-10 20/1000 2026-04-10 22:08 by 猪会飞
[考研] 284求调剂 +9 让我上岸吧阿西 2026-04-09 11/550 2026-04-10 19:18 by 靖jing
[考研] 0858求调剂 5+5 Gky09300550， 2026-04-10 8/400 2026-04-10 19:13 by chemisry
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭