| 查看: 2506 | 回复: 8 | ||||
贝努努哈哈主管区长
|
[求助]
pgex 4t-1载体 无须诱导 已有1人参与
|
|
1、我想从产朊假丝酵母菌中扩增出尿酸酶的基因 但是查genenbank中没有产朊假丝酵母菌来源的尿酸酶mRNA只有DNA 看一些文献设计的引物是按照DNA设计的 是不是在做PCR的过程中省去逆转录的步骤 直接扩增呢 2、设计引物时目的基因的5'端都是以ATG开头的 在目的基因的两端加入酶切位点是在设计好的引物基础上加4-6碱基作为酶切位点还是在5'端改几个碱基使之成为酶切位点？ 3、两个目的基因连接 之间要加入一个酶切位点 我知道不能加目的基因、载体中存在的 但是不存在的酶切位点还有很多 我该怎么选择？ 4、将PGEX 4T-1改造成无需诱导即可表达目的基因的载体 是删除其中的lacIq吗？如何删除？删除后如何将载体重新连接起来呢？ 求大神指导 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有266人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有6人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 有关原核表达载体构建方面的问题
已经有10人回复
- pet28和pet21表达的蛋白对于蛋白结晶的区别
已经有8人回复
- pET-28a与pGEX-4T-1表达蛋白的区别
已经有10人回复
- 关于原核表达载体构建，跪求~~~~
已经有12人回复
- PGEX-4T-1载体表达产物，GST标签的切除
已经有15人回复
- 原核表达载体构建- 遇到的一些问题···
已经有5人回复
- 原核表达重组表达载体的连问题
已经有14人回复
- 原核表达载体蛋白诱导
已经有18人回复
- IPTG诱导表达的问题
已经有12人回复
- 原核表达载体的构建
已经有37人回复
- 构建了个基因的表达载体，发现有一个氨基酸发生突变
已经有10人回复
- 原核表达pGEX-4T-1载体构建后，菌液pcr用什么引物
已经有12人回复
- 原核表达 PET-30载体 目的蛋白分子量偏小？
已经有18人回复
- T7载体的IPTG诱导
已经有10人回复
- GST标签 pGEX
已经有7人回复
- 原核表达蛋白诱导不出来
已经有16人回复
- 【求助/交流】十万火急，IPTG诱导是怎么回事，给我说个大概
已经有9人回复
- 【求助/交流】pGEX-4T-1质粒的抗性是什么？
已经有9人回复
- 【求助/交流】原核表达载体pGEX-4T-1对应的表达菌株
已经有6人回复
gyesang
禁虫
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
2楼2014-07-16 15:00:36
贝努努哈哈
版主
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 516.7
- 散金: 106
- 红花: 1
- 帖子: 273
- 在线: 50.4小时
- 虫号: 2785623
- 注册: 2013-11-07
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
3楼2014-07-17 18:14:21
gyesang
无虫
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
4楼2014-07-18 15:17:04
贝努努哈哈
实习版主
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 516.7
- 散金: 106
- 红花: 1
- 帖子: 273
- 在线: 50.4小时
- 虫号: 2785623
- 注册: 2013-11-07
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
5楼2014-07-19 10:00:20
gyesang
无虫
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
6楼2014-07-19 16:36:35
gyesang
无虫
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-21 08:32:26
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-21 08:32:26
|
先下载这个载体的序列和图谱，比如addgenel里面就有，见http://www.addgene.org/vector-database/2876/  注释里面的ORF frame 3 3441 4400就是编码lacI的序列 |
7楼2014-07-19 16:41:40
贝努努哈哈
主管区长
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 516.7
- 散金: 106
- 红花: 1
- 帖子: 273
- 在线: 50.4小时
- 虫号: 2785623
- 注册: 2013-11-07
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
8楼2014-07-20 10:21:00
gyesang
新虫
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
9楼2014-07-20 20:29:05
10