应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pgex 4t-1载体 无须诱导
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2501  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

贝努努哈哈

铜虫 (小有名气)

[求助] pgex 4t-1载体 无须诱导 已有1人参与

1、我想从产朊假丝酵母菌中扩增出尿酸酶的基因 但是查genenbank中没有产朊假丝酵母菌来源的尿酸酶mRNA只有DNA 看一些文献设计的引物是按照DNA设计的 是不是在做PCR的过程中省去逆转录的步骤 直接扩增呢
2、设计引物时目的基因的5'端都是以ATG开头的 在目的基因的两端加入酶切位点是在设计好的引物基础上加4-6碱基作为酶切位点还是在5'端改几个碱基使之成为酶切位点？
3、两个目的基因连接 之间要加入一个酶切位点 我知道不能加目的基因、载体中存在的 但是不存在的酶切位点还有很多 我该怎么选择？
4、将PGEX 4T-1改造成无需诱导即可表达目的基因的载体 是删除其中的lacIq吗？如何删除？删除后如何将载体重新连接起来呢？
求大神指导
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-07-08 23:15:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贝努努哈哈

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gyesang at 2014-07-19 16:36:35
pGEX-4T-1图谱上有说明哪一段是编码LacI的序列的，然后设计引物扩增序列删除就可以了...

两边找到合适的内切酶删除吗 用DNA连接酶再连接起来吗？我想不通为什么要扩增LacI序列 应该是扩增除了LacI序列的载体才有用啊
赞一下 回复此楼
8楼2014-07-20 10:21:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-07-21 08:29:57
1. 这个基因很可能没有内含子，如果没有内含子完全可以从基因组中扩增获得

2. 基因特异引物设计好后，加酶切位点，而不是改动碱基使之成为酶切位点

3. 可以通过Overlap PCR将两个目的基因连接在一起

4. 也可以将pLac启动子后面的LacO序列删掉即可
赞一下(1人) 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-07-16 15:00:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贝努努哈哈

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-07-16 15:00:36
1. 这个基因很可能没有内含子，如果没有内含子完全可以从基因组中扩增获得

2. 基因特异引物设计好后，加酶切位点，而不是改动碱基使之成为酶切位点

3. 可以通过Overlap PCR将两个目的基因连接在一起

4. 也 ...

这个是不是有两个启动子 要都去掉吗
pgex 4t-1载体 无须诱导
201405080030351881.gif
赞一下 回复此楼
3楼2014-07-17 18:14:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
3楼: Originally posted by 贝努努哈哈 at 2014-07-17 18:14:21
这个是不是有两个启动子 要都去掉吗

201405080030351881.gif
...

你说的是哪两个启动子，说的清楚一点哈
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2014-07-18 15:17:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料科学与工程求调剂 +6 深V宿舍吧 2026-03-29 6/300 2026-03-29 20:51 by 唐沐儿
[考研] 275求调剂 +15 Micky11223 2026-03-25 20/1000 2026-03-29 20:44 by 唐沐儿
[考研] 294分080500材料科学与工程求调剂 +8 柳溪边 2026-03-26 8/400 2026-03-29 20:42 by 唐沐儿
[考研] 考研调剂 +7 小蜡新笔 2026-03-29 7/350 2026-03-29 19:00 by 学员8dgXkO
[考研] 070305高分子化学与物理 304分求调剂 +12 c297914 2026-03-28 12/600 2026-03-29 16:21 by Serene1974
[考研] 一志愿北京理工大学本科211材料工程294求调剂 +8 mikasa的围巾 2026-03-28 8/400 2026-03-29 12:48 by 无际的草原
[考研] 348求调剂 +5 小懒虫不懒了 2026-03-28 5/250 2026-03-29 10:34 by 唐沐儿
[考研] 本科双非材料，跨考一志愿华电085801电气，283求调剂，任何专业都可以 +6 芝士雪baoo 2026-03-28 8/400 2026-03-29 08:16 by 松花缸1201
[考研] 311（085601）求调剂 +4 liziyeyeye 2026-03-28 4/200 2026-03-28 18:50 by 535743368
[考研] 一志愿北化085600材料专硕275|有文章专利｜求调剂 +7 Micky11223 2026-03-25 7/350 2026-03-28 18:34 by 无际的草原
[考研] 340求调剂 +5 jhx777 2026-03-27 5/250 2026-03-28 04:18 by fmesaito
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 12/600 2026-03-27 14:43 by shangxh
[考研] 341求调剂 +7 青柠檬1 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:19 by wxiongid
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:57 by nihaoar
[考研] 生物学 296 求调剂 +4 朵朵- 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:01 by 不吃魚的貓
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生（材料、化学、电化学，环境） +4 我爱学电池 2026-03-23 4/200 2026-03-25 00:59 by 1027_324
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭