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Ever希夷

新虫 (初入文坛)

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[求助] 请问大片段怎么扩已有9人参与

构建好了质粒，但是目的片段将近8000bp，这种大片段用LA taq酶一直扩不出来，请问怎么办？

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1楼 2014-07-07 19:03:00

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jamesfeng

铁虫 (初入文坛)

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专业: 生物化学

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-09 09:31:15

不管怎么样，先根据GC content stucture 先把引物设计好，设计引物是最为关键的，现在世面上买的酶纯度都很高，加上配套的buffer mix 或者buffer 镁离子，效率都很高，建议分成2kb左右的小片段，错配率会降低很多，最后再将片段整合在一起，这样碱基的缺失率就会降低，后续的定点突变也没那么麻烦

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