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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 如何确定自己的目的片段 PCR 痛苦中
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wanglixia815

新虫 (正式写手)

[求助] 如何确定自己的目的片段 PCR 痛苦中 已有7人参与

最近做PCR  条带总是不请楚，第一次做，然后有为老师帮我设置了不同降火温度，出来好多片段。。
我怎么才能知道哪个是我的目的片段呢。。我怎么才能知道我的目的序列呢。。。。帮忙解释一下 各位i
谢谢  痛苦中
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有点矛盾。有点纠结
1楼 2014-04-20 19:04:10
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ljhzyy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wanglixia815(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-21 08:41:52
你好，你PCR之前应该提前知道自己的目的片段大小有多大吧 根据你的目的片段的大小选择合适的marker 关于很多杂带 说明你的退火温度太低了 你需要提高一点退火温度
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2楼2014-04-20 19:18:57
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wanglixia815

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ljhzyy at 2014-04-20 19:18:57
你好，你PCR之前应该提前知道自己的目的片段大小有多大吧 根据你的目的片段的大小选择合适的marker 关于很多杂带 说明你的退火温度太低了 你需要提高一点退火温度

恩，我的目的片段大小应该是600-800bp...我买了两个marker一个是10-1000  一个是10-1500.。。。同一个样设着了不同的退火温度之后。。做出来的片段大小也不一样把？那我怎么知道那个温度的片段是我想要的呢？
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有点矛盾。有点纠结
3楼2014-04-20 22:03:12
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wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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wanglixia815(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-21 08:42:05
首先你要找到你的目的基因吧，NCBI里面找下或者参考文献之类，引物序列你总有吧，用PRIMER5截一下不就大概知道你的目的片段时多大了
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我就是我
4楼2014-04-20 22:05:09
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wanglixia815

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wtyyyyy1988 at 2014-04-20 22:05:09
首先你要找到你的目的基因吧，NCBI里面找下或者参考文献之类，引物序列你总有吧，用PRIMER5截一下不就大概知道你的目的片段时多大了

我现在就是不知道怎么找目的基因，我有引物序列。。Primer5?是什么意思  我一点儿基础都没有啊
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有点矛盾。有点纠结
5楼2014-04-20 22:57:45
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jiaolong11a

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
ncbi有一个功能是primer blast，你把引物序列输进去，就可以知道你所扩增的目的片段大小，退火温度高一些，
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多情总被无情扰。。。愁
6楼2014-04-21 08:55:42
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wangweijian

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你设计引物用模板包含了目的基因，你的目的基因名称应该知道吧？把目的基因名称输入NCBI 的nucleic,收索下即可
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7楼2014-04-21 11:03:07
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wanglixia815

新虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jiaolong11a at 2014-04-21 08:55:42
ncbi有一个功能是primer blast，你把引物序列输进去，就可以知道你所扩增的目的片段大小，退火温度高一些，

懂了，我去试试。我现在引物是别人告诉我的。
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有点矛盾。有点纠结
8楼2014-04-21 14:02:40
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wanglixia815

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wangweijian at 2014-04-21 11:03:07
你设计引物用模板包含了目的基因，你的目的基因名称应该知道吧？把目的基因名称输入NCBI 的nucleic,收索下即可

我的引物是别人告诉我的，目的基因的名称？我知道引物序列，知道我要从spruce的菌根里提取DNA鉴别菌根的种类？怎么知道目的基因的？feichang感谢
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有点矛盾。有点纠结
9楼2014-04-21 14:06:11
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wanglixia815

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wangweijian at 2014-04-21 11:03:07
你设计引物用模板包含了目的基因，你的目的基因名称应该知道吧？把目的基因名称输入NCBI 的nucleic,收索下即可

ITS1 + 5.8 + ITS2这是目的基因的名称吗？550-850 bp？
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有点矛盾。有点纠结
10楼2014-04-21 15:53:14
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