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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wanglixia815

新虫 (正式写手)

[求助] 如何确定自己的目的片段 PCR 痛苦中 已有7人参与

最近做PCR  条带总是不请楚,第一次做,然后有为老师帮我设置了不同降火温度,出来好多片段。。
我怎么才能知道哪个是我的目的片段呢。。我怎么才能知道我的目的序列呢。。。。帮忙解释一下 各位i
谢谢  痛苦中
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有点矛盾。有点纠结
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ljhzyy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wanglixia815(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-21 08:41:52
你好,你PCR之前应该提前知道自己的目的片段大小有多大吧 根据你的目的片段的大小选择合适的marker 关于很多杂带 说明你的退火温度太低了 你需要提高一点退火温度
2楼2014-04-20 19:18:57
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wanglixia815

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ljhzyy at 2014-04-20 19:18:57
你好,你PCR之前应该提前知道自己的目的片段大小有多大吧 根据你的目的片段的大小选择合适的marker 关于很多杂带 说明你的退火温度太低了 你需要提高一点退火温度

恩,我的目的片段大小应该是600-800bp...我买了两个marker一个是10-1000  一个是10-1500.。。。同一个样设着了不同的退火温度之后。。做出来的片段大小也不一样把?那我怎么知道那个温度的片段是我想要的呢?
有点矛盾。有点纠结
3楼2014-04-20 22:03:12
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wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wanglixia815(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-21 08:42:05
首先你要找到你的目的基因吧,NCBI里面找下或者参考文献之类,引物序列你总有吧,用PRIMER5截一下不就大概知道你的目的片段时多大了
我就是我
4楼2014-04-20 22:05:09
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wanglixia815

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wtyyyyy1988 at 2014-04-20 22:05:09
首先你要找到你的目的基因吧,NCBI里面找下或者参考文献之类,引物序列你总有吧,用PRIMER5截一下不就大概知道你的目的片段时多大了

我现在就是不知道怎么找目的基因,我有引物序列。。Primer5?是什么意思  我一点儿基础都没有啊
有点矛盾。有点纠结
5楼2014-04-20 22:57:45
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jiaolong11a

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
ncbi有一个功能是primer blast,你把引物序列输进去,就可以知道你所扩增的目的片段大小,退火温度高一些,
多情总被无情扰。。。愁
6楼2014-04-21 08:55:42
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wangweijian

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你设计引物用模板包含了目的基因,你的目的基因名称应该知道吧?把目的基因名称输入NCBI 的nucleic,收索下即可
7楼2014-04-21 11:03:07
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wanglixia815

新虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by jiaolong11a at 2014-04-21 08:55:42
ncbi有一个功能是primer blast,你把引物序列输进去,就可以知道你所扩增的目的片段大小,退火温度高一些,

懂了,我去试试。我现在引物是别人告诉我的。
有点矛盾。有点纠结
8楼2014-04-21 14:02:40
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wanglixia815

新虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by wangweijian at 2014-04-21 11:03:07
你设计引物用模板包含了目的基因,你的目的基因名称应该知道吧?把目的基因名称输入NCBI 的nucleic,收索下即可

我的引物是别人告诉我的,目的基因的名称?我知道引物序列,知道我要从spruce的菌根里提取DNA鉴别菌根的种类?怎么知道目的基因的?feichang感谢
有点矛盾。有点纠结
9楼2014-04-21 14:06:11
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wanglixia815

新虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by wangweijian at 2014-04-21 11:03:07
你设计引物用模板包含了目的基因,你的目的基因名称应该知道吧?把目的基因名称输入NCBI 的nucleic,收索下即可

ITS1 + 5.8 + ITS2这是目的基因的名称吗?550-850 bp?
有点矛盾。有点纠结
10楼2014-04-21 15:53:14
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