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wanglixia815

新虫 (正式写手)

[求助] 如何确定自己的目的片段 PCR 痛苦中 已有7人参与

最近做PCR  条带总是不请楚,第一次做,然后有为老师帮我设置了不同降火温度,出来好多片段。。
我怎么才能知道哪个是我的目的片段呢。。我怎么才能知道我的目的序列呢。。。。帮忙解释一下 各位i
谢谢  痛苦中
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有点矛盾。有点纠结
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wanglixia815

新虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by wangweijian at 2014-04-21 11:03:07
你设计引物用模板包含了目的基因,你的目的基因名称应该知道吧?把目的基因名称输入NCBI 的nucleic,收索下即可

ITS1 + 5.8 + ITS2这是目的基因的名称吗?550-850 bp?
有点矛盾。有点纠结
10楼2014-04-21 15:53:14
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查看全部 18 个回答

ljhzyy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wanglixia815(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-21 08:41:52
你好,你PCR之前应该提前知道自己的目的片段大小有多大吧 根据你的目的片段的大小选择合适的marker 关于很多杂带 说明你的退火温度太低了 你需要提高一点退火温度
2楼2014-04-20 19:18:57
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wanglixia815

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ljhzyy at 2014-04-20 19:18:57
你好,你PCR之前应该提前知道自己的目的片段大小有多大吧 根据你的目的片段的大小选择合适的marker 关于很多杂带 说明你的退火温度太低了 你需要提高一点退火温度

恩,我的目的片段大小应该是600-800bp...我买了两个marker一个是10-1000  一个是10-1500.。。。同一个样设着了不同的退火温度之后。。做出来的片段大小也不一样把?那我怎么知道那个温度的片段是我想要的呢?
有点矛盾。有点纠结
3楼2014-04-20 22:03:12
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wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wanglixia815(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-21 08:42:05
首先你要找到你的目的基因吧,NCBI里面找下或者参考文献之类,引物序列你总有吧,用PRIMER5截一下不就大概知道你的目的片段时多大了
我就是我
4楼2014-04-20 22:05:09
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