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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pfu扩出的片段回收后怎么加A
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yinsongna

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】pfu扩出的片段回收后怎么加A 已有7人参与

RT pfu扩完要做TA克隆的，结果做完回收才记得忘加A了。。。。。有虫子知道回收后再怎么加吗 谢谢了   在线等～～
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1楼 2010-05-13 16:41:08
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
yinsongna(金币+1): 2010-05-13 17:31:29
补加点Taq酶，反应一会儿即可。。。
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2010-05-13 16:49:36
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yinsongna

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-05-13 16:49:36:
补加点Taq酶，反应一会儿即可。。。

补加点Taq酶不是应该在PCR结束后加码，我回收的产物只有片段，没有引物了，再加Taq酶还行吗
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3楼2010-05-13 16:52:02
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liyong1981

金虫 (正式写手)
yinsongna(金币+1): 2010-05-13 17:31:36
帮你问问～
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4楼2010-05-13 16:55:05
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
yinsongna(金币+1): 2010-05-13 17:31:49
yinsongna(金币+1): 2010-05-13 17:34:20
不需要引物了吧，又不是重新合成，只是在末端添加A嘛
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
5楼2010-05-13 16:55:12
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miya173

银虫 (小有名气)
yinsongna(金币+1): 2010-05-13 17:31:53
yinsongna(金币+1): 2010-05-13 17:34:17
加尾反应：PCR产物+dATP+TAQ酶，72度下15~30min就可以了
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6楼2010-05-13 17:20:51
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yinsongna

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by miya173 at 2010-05-13 17:20:51:
加尾反应：PCR产物+dATP+TAQ酶，72度下15~30min就可以了

我的PCR产物已经胶回收过了还可以这样做吗
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7楼2010-05-13 17:31:20
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yinsongna

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-05-13 16:55:12:
不需要引物了吧，又不是重新合成，只是在末端添加A嘛

Taq酶加多少啊 还要dNTP吗 要多少？ 谢谢
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8楼2010-05-13 17:37:14
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lingn

木虫 (正式写手)
★
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-05-13 21:44:18
yinsongna(金币+1): 2010-05-13 21:51:41
不能直接加tag，加上的A还会被pfu切掉的。
要回收之后，就跟重新PCR似的，加tag，buffer，dATP，72度5分钟。dNTP也可以。
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9楼2010-05-13 21:10:31
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yinsongna

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lingn at 2010-05-13 21:10:31:
不能直接加tag，加上的A还会被pfu切掉的。
要回收之后，就跟重新PCR似的，加tag，buffer，dATP，72度5分钟。dNTP也可以。

都加多少啊
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10楼2010-05-13 21:52:16
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