| 查看: 1781 | 回复: 11 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
寻香海棠新虫 (初入文坛)
|
[求助]
关于菌落PCR，请教高手几个问题！ 已有4人参与
|
||
|
最开始做的时候用机器里之前师兄师姐设定的程序如下： 95℃ 3min 95℃ 30s 55℃ 30s 72℃ 25s 72℃ 10min 使用通用引物，两次都没成功，后来发现延伸时间太短，设为1min30s后，7个菌成功了4个，还有3个我按照修改后的方法来做仍然没有一个成功！这是什么回事呢？ 然后我分析可能是预变性时间太短，没有将细胞壁裂解，打算设为10min，同时担心挑入培养基进入体系干扰实验，打算将液体培养的菌液离心取适量菌体。 请问大神这样做合不合适？还有什么可以改进的吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有129人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 3’端race菌落PCR体系的问题
已经有3人回复
- 菌落PCR 之前能P出来，后来就重复不出来了
已经有9人回复
- 菌落PCR有杂带
已经有16人回复
- 菌液pcr总是做不出！求高手解答！
已经有18人回复
- 关于进行PCR的dNTP
已经有4人回复
- 菌落pcr没结果
已经有19人回复
- 求助：菌落PCR条带弱且拖尾是怎么回事啊？
已经有18人回复
- 菌落PCR多条带，还能往后做双酶切吗
已经有25人回复
- 菌落PCR与扩繁后提取质粒PCR
已经有5人回复
- 最近做的菌落pcr，可以做胶回收吗？
已经有28人回复
- 转化后菌落pcr有目的条带，小摇长菌，再大摇不长了，求帮助~
已经有14人回复
- 求助，关于搭桥PCR
已经有6人回复
- 揪心的菌落PCR
已经有16人回复
- 菌落PCR无条带
已经有19人回复
- 关于转化、菌落PCR
已经有8人回复
- 请教各位前辈 为什么我做菌落PCR总也P不出来
已经有28人回复
- 连接转化后菌落PCR验证出现非特异性扩增
已经有5人回复
- 【求助/交流】菌落PCR问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】菌落PCR的条件
已经有14人回复
- 【求助/交流】寻求用通用引物进行菌落PCR，无条带的原因
已经有3人回复
- 【求助/交流】菌落PCR扩出来的片段不是目的片段，咋办啊？？？？
已经有9人回复
- 【求助/交流】菌落PCR为什么每次都扩不出来呢？
已经有9人回复
- 【求助/交流】菌落PCR求助
已经有23人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
寻香海棠(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-06 17:47:26
感谢参与，应助指数 +1
寻香海棠(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-06 17:47:26
|
就我做实验的结果来看，菌液比菌落难扩的多，菌液浓度比菌落要高很多，换句话说，就是你不好掌控PCR体系中模板的量。 只要你的PCR体系合适，PCR体系中沾点琼脂完全不是问题。 目前你扩不出16s，主要有两个原因，一是引物不合适，二是程序或体系不合适。 虽然是通用引物，但并不一定合适你的菌。你可以自己尝试设计一下，或者去网上找找16s的通用引物，你会发现通用引物的序列并不是只有一种，建议你尝试一下其他的。 有关PCR的体系和程序，要看你用哪一种酶。比如说takara的easytaq，你可以去网上找到它的说明书，说明书里就有PCR体系和程序，不要再沿用师兄师姐的程序和体系了，那不一定合适。一般变性这一步对于细菌菌落PCR来说不是很重要，延长到10min也不会有很好的效果。 祝实验顺利！  |
7楼2014-07-05 21:48:09
随风飘摇11
木虫 (著名写手)
- 应助: 92 (初中生)
- 金币: 2284.9
- 散金: 606
- 红花: 53
- 帖子: 2249
- 在线: 818.5小时
- 虫号: 1146270
- 注册: 2010-11-14
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2014-07-05 09:25:34
寻香海棠
新虫 (初入文坛)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 711.5
- 散金: 10
- 帖子: 49
- 在线: 13.8小时
- 虫号: 3265268
- 注册: 2014-06-09
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2014-07-05 09:51:59
寻香海棠
新虫 (初入文坛)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 711.5
- 散金: 10
- 帖子: 49
- 在线: 13.8小时
- 虫号: 3265268
- 注册: 2014-06-09
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2014-07-05 09:52:43
