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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】菌落PCR的条件
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犹寒

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】菌落PCR的条件 已有14人参与

请问：菌落PCR的条件大概是多少？从变性、退火到延伸，我的目的片段大约是660bp，谢谢大家了。
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1楼 2011-01-06 10:28:44
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★
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dhd997(金币+1):good 2011-01-06 10:37:46
和普通PCR一样，我只是喜欢将预变性的时间延长1-2 min.
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Thank-you，so-blue.
2楼2011-01-06 10:35:36
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poog502

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-01-06 10:35:36:
和普通PCR一样，我只是喜欢将预变性的时间延长1-2 min.

94℃ 5min; 94℃ 30S， XX℃ 30S， 72℃ 50S （660bp 50S足以）(25-30cycles); 72℃ 7min
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3楼2011-01-06 11:00:25
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼
★ ★
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dhd997(金币+1):热心版版。 2011-01-06 12:19:36
菌落PCR的话，预变性时间可以稍微长一点没关系
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严于律己，宽以待人
4楼2011-01-06 11:05:50
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-超越beyond

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★
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dhd997(金币+1):鼓励交流 2011-01-06 12:19:45
silicare(金币+1):谢谢参与 2011-01-06 12:22:09
预变性时间长一些，10分钟吧，要破菌，其他的不变
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5楼2011-01-06 11:42:35
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shourjruo

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
其实菌量并不是很多，普通pcr的方法完全做的，不要怎么变条件
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当思考成为习惯，成功将不期而至。
6楼2011-01-06 13:06:31
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
正常PCR时候是啥体系就还用啥体系，在之前牙签挑完了之后PCR仪95度煮沸2分钟，加上这步就可以了。
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7楼2011-01-06 13:18:31
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快乐小文文

银虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
预变性时间稍长，退火温度适当高1-2度。循环数可减少，如果模板多的话。
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8楼2011-01-06 13:47:53
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duanming123

木虫 (正式写手)
和普通PCR一样
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9楼2011-01-06 15:09:47
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zhaoge_2005

金虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by shourjruo at 2011-01-06 13:06:31:
其实菌量并不是很多，普通pcr的方法完全做的，不要怎么变条件

对，除了这步，其它和普通PCR相同的
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10楼2011-01-06 19:02:08
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