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犹寒

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】菌落PCR的条件 已有14人参与

请问:菌落PCR的条件大概是多少?从变性、退火到延伸,我的目的片段大约是660bp,谢谢大家了。
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★
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dhd997(金币+1):good 2011-01-06 10:37:46
和普通PCR一样,我只是喜欢将预变性的时间延长1-2 min.
Thank-you,so-blue.
2楼2011-01-06 10:35:36
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poog502

木虫 (正式写手)


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引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-01-06 10:35:36:
和普通PCR一样,我只是喜欢将预变性的时间延长1-2 min.

94℃ 5min; 94℃ 30S, XX℃ 30S, 72℃ 50S (660bp 50S足以)(25-30cycles); 72℃ 7min
3楼2011-01-06 11:00:25
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼

★ ★
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dhd997(金币+1):热心版版。 2011-01-06 12:19:36
菌落PCR的话,预变性时间可以稍微长一点没关系
严于律己,宽以待人
4楼2011-01-06 11:05:50
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-超越beyond

铁虫 (小有名气)

★ ★ ★
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dhd997(金币+1):鼓励交流 2011-01-06 12:19:45
silicare(金币+1):谢谢参与 2011-01-06 12:22:09
预变性时间长一些,10分钟吧,要破菌,其他的不变
5楼2011-01-06 11:42:35
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shourjruo

铜虫 (小有名气)


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其实菌量并不是很多,普通pcr的方法完全做的,不要怎么变条件
当思考成为习惯,成功将不期而至。
6楼2011-01-06 13:06:31
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amilie030312

金虫 (正式写手)


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正常PCR时候是啥体系就还用啥体系,在之前牙签挑完了之后PCR仪95度煮沸2分钟,加上这步就可以了。
7楼2011-01-06 13:18:31
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快乐小文文

银虫 (著名写手)


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预变性时间稍长,退火温度适当高1-2度。循环数可减少,如果模板多的话。
8楼2011-01-06 13:47:53
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duanming123

木虫 (正式写手)

和普通PCR一样
9楼2011-01-06 15:09:47
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zhaoge_2005

金虫 (小有名气)


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引用回帖:
Originally posted by shourjruo at 2011-01-06 13:06:31:
其实菌量并不是很多,普通pcr的方法完全做的,不要怎么变条件

对,除了这步,其它和普通PCR相同的
10楼2011-01-06 19:02:08
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