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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 酵母基因组提取
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动力小火车

新虫 (初入文坛)

[求助] 酵母基因组提取 已有2人参与

用玻璃珠震荡的方法提取酿酒酵母基因组，可是跑0.7%的DNA胶，1500一下的条带全都是弥散的，请教一下这最可能是哪步出了问题呢？还有就是，我提基因组的目的主要是为了将其作为模板，PCR获得目的片段。所以如果能够进行菌落PCR是最好的。尝试了直接挑取菌落溶于20ul双蒸水中，95度加热20min后取2ul作为模板。可是不行，想请教一下，怎样处理菌落更容易直接进行PCR呢？

酵母基因组提取
20140625.jpg
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1楼 2014-06-28 09:27:15
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Neo2000

木虫 (著名写手)
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-29 17:22:21
lyticase消化下细胞壁，提起来就容易多了

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2楼2014-06-28 11:36:26
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d00614028

银虫 (小有名气)
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-29 17:22:27
菌落PCR的话取0.2%的SDS  30ul于PCR管内，然后挑取单菌落于SDS中，在PCR仪上99度10min，冷却后取1ul（或者2ul）的上清作为模板。
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3楼2014-06-29 15:41:54
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Neo2000

木虫 (著名写手)
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3楼: Originally posted by d00614028 at 2014-06-29 15:41:54
菌落PCR的话取0.2%的SDS  30ul于PCR管内，然后挑取单菌落于SDS中，在PCR仪上99度10min，冷却后取1ul（或者2ul）的上清作为模板。

残留的sds会抑制酶活的，不建议这么整

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4楼2014-06-29 17:00:40
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动力小火车

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-29 17:00:40
残留的sds会抑制酶活的，不建议这么整
...

那您有什么建议么？我用试剂盒也提不出来.
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5楼2014-06-29 20:46:08
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Neo2000

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 动力小火车 at 2014-06-29 20:46:08
那您有什么建议么？我用试剂盒也提不出来....

我用宝生物的试剂盒提3ml菌液，质量挺好的。

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6楼2014-06-29 21:39:50
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yuhan131481

铁虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-16 13:12:28
用蜗牛酶消化下细胞壁，在离心用水重悬，可以用于菌p
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7楼2014-06-30 08:44:55
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michaelkimWu

新虫 (初入文坛)
我们做酵母的都是用clone tech的试剂盒，做很多年了，可以尝试一下
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8楼2014-06-30 09:06:47
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zhenhu

新虫 (初入文坛)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-30 21:02:23
菌落PCR的话取0.2%的SDS  30ul于PCR管内，然后挑取单菌落于SDS中， 95°煮15分钟，-80°冻15分钟。重负2次，然后进行PCR，我们就用这方法，已经提出来了 。
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9楼2014-06-30 15:45:13
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动力小火车

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by zhenhu at 2014-06-30 15:45:13
菌落PCR的话取0.2%的SDS  30ul于PCR管内，然后挑取单菌落于SDS中， 95°煮15分钟，-80°冻15分钟。重负2次，然后进行PCR，我们就用这方法，已经提出来了 。

谢谢啊，那PCR的时候是取包含菌落的SDS溶液作为模板么？50ul的体系一般取多少呢？
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10楼2014-07-07 08:53:57
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