应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 酵母基因组提取
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
141/2返回列表12下一页
查看: 3493  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

动力小火车

新虫 (初入文坛)

[求助] 酵母基因组提取 已有2人参与

用玻璃珠震荡的方法提取酿酒酵母基因组，可是跑0.7%的DNA胶，1500一下的条带全都是弥散的，请教一下这最可能是哪步出了问题呢？还有就是，我提基因组的目的主要是为了将其作为模板，PCR获得目的片段。所以如果能够进行菌落PCR是最好的。尝试了直接挑取菌落溶于20ul双蒸水中，95度加热20min后取2ul作为模板。可是不行，想请教一下，怎样处理菌落更容易直接进行PCR呢？

酵母基因组提取
20140625.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-06-28 09:27:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-29 17:22:21
lyticase消化下细胞壁，提起来就容易多了

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-06-28 11:36:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

d00614028

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-06-29 17:22:27
菌落PCR的话取0.2%的SDS  30ul于PCR管内，然后挑取单菌落于SDS中，在PCR仪上99度10min，冷却后取1ul（或者2ul）的上清作为模板。
赞一下 回复此楼
3楼2014-06-29 15:41:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by d00614028 at 2014-06-29 15:41:54
菌落PCR的话取0.2%的SDS  30ul于PCR管内，然后挑取单菌落于SDS中，在PCR仪上99度10min，冷却后取1ul（或者2ul）的上清作为模板。

残留的sds会抑制酶活的，不建议这么整

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
4楼2014-06-29 17:00:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

动力小火车

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-29 17:00:40
残留的sds会抑制酶活的，不建议这么整
...

那您有什么建议么？我用试剂盒也提不出来.
赞一下 回复此楼
5楼2014-06-29 20:46:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 动力小火车 at 2014-06-29 20:46:08
那您有什么建议么？我用试剂盒也提不出来....

我用宝生物的试剂盒提3ml菌液，质量挺好的。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
6楼2014-06-29 21:39:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuhan131481

铁虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-16 13:12:28
用蜗牛酶消化下细胞壁，在离心用水重悬，可以用于菌p
赞一下 回复此楼
7楼2014-06-30 08:44:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

michaelkimWu

新虫 (初入文坛)
我们做酵母的都是用clone tech的试剂盒，做很多年了，可以尝试一下
赞一下 回复此楼
8楼2014-06-30 09:06:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhenhu

新虫 (初入文坛)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-30 21:02:23
菌落PCR的话取0.2%的SDS  30ul于PCR管内，然后挑取单菌落于SDS中， 95°煮15分钟，-80°冻15分钟。重负2次，然后进行PCR，我们就用这方法，已经提出来了 。
赞一下 回复此楼
9楼2014-06-30 15:45:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

动力小火车

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by zhenhu at 2014-06-30 15:45:13
菌落PCR的话取0.2%的SDS  30ul于PCR管内，然后挑取单菌落于SDS中， 95°煮15分钟，-80°冻15分钟。重负2次，然后进行PCR，我们就用这方法，已经提出来了 。

谢谢啊，那PCR的时候是取包含菌落的SDS溶液作为模板么？50ul的体系一般取多少呢？
赞一下 回复此楼
10楼2014-07-07 08:53:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 动力小火车 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-04-04 9/450 2026-04-06 00:06 by 永字号
[考研] 308求调剂 +4 maverick^_^ 2026-04-03 4/200 2026-04-05 19:08 by 蓝云思雨
[考研] 348求调剂 +6 wukira 2026-04-04 6/300 2026-04-05 18:11 by 猪会飞
[考研] 298分 070300求调剂 +15 zwen03 2026-04-02 15/750 2026-04-05 12:52 by Hdyxbekcb
[考研] 一志愿南航，数一英一学硕317求调剂！！ +5 Acaciad 2026-04-04 5/250 2026-04-05 12:31 by 搏击518
[考研] 数一英一 347 人工智能国奖论文都有求调剂 +3 乌拉儿山脉 2026-03-30 7/350 2026-04-05 10:32 by zhq0425
[考研] 085701求调剂 +7 龚禹铭 2026-04-04 8/400 2026-04-04 13:49 by 小小树2024
[考研] 求生物学专业调剂-332分 +5 云朵遛弯指南 2026-04-04 5/250 2026-04-04 10:05 by rzh123456
[考研] 考研调剂 +5 小sun要好运 2026-04-03 5/250 2026-04-03 21:43 by 啵啵啵0119
[考研] 315分 085602 求调剂 +15 26考研上岸版26 2026-04-02 15/750 2026-04-03 12:45 by xingguangj
[考研] 一志愿安徽大学0817化学工程与技术，求调剂 +14 我不是只因 2026-04-02 15/750 2026-04-03 09:49 by 蓝云思雨
[考研] 309求调剂 +14 呆菇不是戴夫 2026-04-02 14/700 2026-04-03 09:42 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +3 好好读书。 2026-04-01 6/300 2026-04-02 15:49 by liumengping
[考研] 282求调剂 +13 呼吸都是减肥 2026-04-01 13/650 2026-04-02 14:10 by baoball
[考研] 材料专业求调剂 +10 月月鸟木 2026-04-01 10/500 2026-04-02 12:57 by wxiongid
[考研] 271求调剂 +15 勒布朗@ 2026-03-31 20/1000 2026-04-02 11:24 by Sammy2
[考研] 298求调剂 +4 什么是胖头鱼 2026-03-30 6/300 2026-04-01 22:06 by 客尔美德
[考研] 349求调剂 +6 吃的不少 2026-04-01 6/300 2026-04-01 17:55 by JYD2011
[考研] 求调剂 +4 图鉴212 2026-03-30 5/250 2026-04-01 15:32 by 图鉴212
[考研] 083000环境科学与工程调剂，总分281 +4 橙子（胜意） 2026-03-30 4/200 2026-03-31 00:44 by Linzejun
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭