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酵母提取基因组有几步不懂,求各位帮忙!!!
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蜗牛酶反复冻融法提取酵母基因组 1 收集过夜培养16~18h 的菌体1.5mL,加入500μLPBS 溶液重悬菌体,12000r/min 离心2min,用PBS 重洗一次 2 将沉淀溶于35μL 的蜗牛酶溶液中,加入65μL的PBS,45℃作用2h,加100μL 裂解液,- 20℃冷冻,然后室温振荡溶解,反复3 次 3 向悬浮液中加入150μL 5mol/L KAc(pH8.9)轻轻混匀,然后10000r/min 离心5min. 4 取上清液,加入两倍体积的无水乙醇,轻轻混匀,室温放置5min; 5 12000r/min 离心10min,将沉淀溶解在100μL TE 中;加入等体积的酚- 氯仿- 异戊醇(体积比25:24:1),轻柔颠倒混匀,12000r/min 离心5min, 6 重复抽提1 次 7 ,加1/10 体积的3mol/L 醋酸钠(pH5.2),2.5 倍体积的无水乙醇,- 20℃放置30min; 8 10000r/min离心5min,弃上清液,用70% 乙醇溶液洗涤沉淀两次。 9 室温干燥后用20μL TE 溶解;加入0.5μL 10mg/mL 的RNaseA,37℃温浴30min,自然冷却后保存 求解:其中第三步加入150μL 5mol/L KAc(pH8.9)和第四步加入两倍体积的无水乙醇的作用是什么? |
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