应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母提取基因组有几步不懂，求各位帮忙！！！
51/1返回列表
查看: 885  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

fanwww12

铁虫 (初入文坛)

[求助] 酵母提取基因组有几步不懂，求各位帮忙！！！

蜗牛酶反复冻融法提取酵母基因组
1  收集过夜培养16～18h 的菌体1.5mL，加入500μLPBS 溶液重悬菌体，12000r/min 离心2min，用PBS 重洗一次
2  将沉淀溶于35μL 的蜗牛酶溶液中，加入65μL的PBS，45℃作用2h，加100μL 裂解液，－ 20℃冷冻，然后室温振荡溶解，反复3 次
3  向悬浮液中加入150μL 5mol/L KAc(pH8.9)轻轻混匀，然后10000r/min 离心5min.
4  取上清液，加入两倍体积的无水乙醇，轻轻混匀，室温放置5min；
5  12000r/min 离心10min，将沉淀溶解在100μL TE 中；加入等体积的酚- 氯仿- 异戊醇(体积比25:24:1)，轻柔颠倒混匀，12000r/min 离心5min，
6  重复抽提1 次
7 ，加1/10 体积的3mol/L 醋酸钠(pH5.2)，2.5 倍体积的无水乙醇，－ 20℃放置30min；
8  10000r/min离心5min，弃上清液，用70% 乙醇溶液洗涤沉淀两次。
9  室温干燥后用20μL TE 溶解；加入0.5μL 10mg/mL 的RNaseA，37℃温浴30min，自然冷却后保存

求解：其中第三步加入150μL 5mol/L KAc(pH8.9)和第四步加入两倍体积的无水乙醇的作用是什么？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-08-07 18:13:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-08 14:19:37
引用回帖:
3楼: Originally posted by fanwww12 at 2012-08-07 20:34:52
首先谢谢你的帮助，我们实验第五.六步才是使蛋白质沉淀的，三四两步应该跟沉淀没关系吧！...

我也有点纠结自己的答案是否正确。貌似酸性醋酸钾溶液才能起到比较好的蛋白沉淀效果；而在楼主的方法中，也没有用到SDS，所以也不需要利用醋酸钾置换钠使SDS沉淀（楼主确定不需要SDS么？）。
另一个猜测，醋酸钾溶液是用于沉淀多糖的？
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
4楼2012-08-07 20:55:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 感谢发帖帮助回答问题。 2012-08-07 19:19:41
醋酸钾作用估计是提供一个高盐环境，使DNA上的蛋白质沉淀，通过下面的离心步骤除去。
加两倍体积乙醇，主要是形成约为70%的乙醇溶液。在前面的步骤中，由于高盐存在，往往会形成DNA-阳离子盐，在70%乙醇中，DNA容易沉淀，而盐则较易溶解，这样可以达到纯化沉淀DNA的目的。
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2012-08-07 18:28:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanwww12

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-08-07 18:28:15
醋酸钾作用估计是提供一个高盐环境，使DNA上的蛋白质沉淀，通过下面的离心步骤除去。
加两倍体积乙醇，主要是形成约为70%的乙醇溶液。在前面的步骤中，由于高盐存在，往往会形成DNA-阳离子盐，在70%乙醇中，DNA容易 ...

首先谢谢你的帮助，我们实验第五.六步才是使蛋白质沉淀的，三四两步应该跟沉淀没关系吧！
赞一下 回复此楼
3楼2012-08-07 20:34:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学336分求调剂 +6 zbzihdhd 2026-03-15 7/350 2026-03-18 09:53 by zhukairuo
[考研] 281求调剂（0805） +3 烟汐忆海 2026-03-16 9/450 2026-03-18 07:23 by 烟汐忆海
[考研] 材料与化工求调剂 +6 为学666 2026-03-16 6/300 2026-03-17 20:15 by peike
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-16 8/400 2026-03-17 19:03 by Wangjingyue
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +6 SUICHILD 2026-03-12 6/300 2026-03-17 09:24 by 雾散后相遇lc
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-12 7/350 2026-03-13 23:24 by 邱gl
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123！ 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:18 by JourneyLucky
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭