应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母提取基因组有几步不懂，求各位帮忙！！！
51/1返回列表
查看: 886  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

fanwww12

铁虫 (初入文坛)

[求助] 酵母提取基因组有几步不懂，求各位帮忙！！！

蜗牛酶反复冻融法提取酵母基因组
1  收集过夜培养16～18h 的菌体1.5mL，加入500μLPBS 溶液重悬菌体，12000r/min 离心2min，用PBS 重洗一次
2  将沉淀溶于35μL 的蜗牛酶溶液中，加入65μL的PBS，45℃作用2h，加100μL 裂解液，－ 20℃冷冻，然后室温振荡溶解，反复3 次
3  向悬浮液中加入150μL 5mol/L KAc(pH8.9)轻轻混匀，然后10000r/min 离心5min.
4  取上清液，加入两倍体积的无水乙醇，轻轻混匀，室温放置5min；
5  12000r/min 离心10min，将沉淀溶解在100μL TE 中；加入等体积的酚- 氯仿- 异戊醇(体积比25:24:1)，轻柔颠倒混匀，12000r/min 离心5min，
6  重复抽提1 次
7 ，加1/10 体积的3mol/L 醋酸钠(pH5.2)，2.5 倍体积的无水乙醇，－ 20℃放置30min；
8  10000r/min离心5min，弃上清液，用70% 乙醇溶液洗涤沉淀两次。
9  室温干燥后用20μL TE 溶解；加入0.5μL 10mg/mL 的RNaseA，37℃温浴30min，自然冷却后保存

求解：其中第三步加入150μL 5mol/L KAc(pH8.9)和第四步加入两倍体积的无水乙醇的作用是什么？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-08-07 18:13:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanwww12

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-08-07 18:28:15
醋酸钾作用估计是提供一个高盐环境，使DNA上的蛋白质沉淀，通过下面的离心步骤除去。
加两倍体积乙醇，主要是形成约为70%的乙醇溶液。在前面的步骤中，由于高盐存在，往往会形成DNA-阳离子盐，在70%乙醇中，DNA容易 ...

首先谢谢你的帮助，我们实验第五.六步才是使蛋白质沉淀的，三四两步应该跟沉淀没关系吧！
赞一下 回复此楼
3楼2012-08-07 20:34:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 感谢发帖帮助回答问题。 2012-08-07 19:19:41
醋酸钾作用估计是提供一个高盐环境，使DNA上的蛋白质沉淀，通过下面的离心步骤除去。
加两倍体积乙醇，主要是形成约为70%的乙醇溶液。在前面的步骤中，由于高盐存在，往往会形成DNA-阳离子盐，在70%乙醇中，DNA容易沉淀，而盐则较易溶解，这样可以达到纯化沉淀DNA的目的。
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2012-08-07 18:28:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-08 14:19:37
引用回帖:
3楼: Originally posted by fanwww12 at 2012-08-07 20:34:52
首先谢谢你的帮助，我们实验第五.六步才是使蛋白质沉淀的，三四两步应该跟沉淀没关系吧！...

我也有点纠结自己的答案是否正确。貌似酸性醋酸钾溶液才能起到比较好的蛋白沉淀效果；而在楼主的方法中，也没有用到SDS，所以也不需要利用醋酸钾置换钠使SDS沉淀（楼主确定不需要SDS么？）。
另一个猜测，醋酸钾溶液是用于沉淀多糖的？
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
4楼2012-08-07 20:55:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 8/400 2026-03-18 10:24 by Eember.
[考研] 环境工程调剂 +8 大可digkids 2026-03-16 8/400 2026-03-18 09:36 by zhukairuo
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +5 慕寒mio 2026-03-16 5/250 2026-03-17 21:31 by hmn_wj
[考研] 296求调剂 +5 大口吃饭 身体健 2026-03-13 5/250 2026-03-17 21:05 by 不惑可乐
[考研] 341求调剂 +5 捣蛋猪猪 2026-03-11 7/350 2026-03-17 19:09 by 捣蛋猪猪
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林，给自己招师弟中～ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 材料与化工专硕调剂 +5 heming3743 2026-03-16 5/250 2026-03-17 14:03 by 勇敢太监王公公
[考研] 286求调剂 +3 lemonzzn 2026-03-16 5/250 2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +5 Liwangman 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:10 by 我的船我的海
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗？ 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 0703化学调剂 +6 妮妮ninicgb 2026-03-15 9/450 2026-03-16 16:40 by houyaoxu
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 0703化学一志愿211 总分320求调剂 +5 玛卡巴卡啊哈 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:40 by JourneyLucky
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 314求调剂 +7 无懈可击的巨人 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 270求调剂 085600材料与化工专硕 +3 YXCT 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:13 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭