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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 想检测一个大约4kD 的小肽片段，western blot 一直没有条带怎么办
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wangxueflower

木虫 (小有名气)

[交流] 想检测一个大约4kD 的小肽片段，western blot 一直没有条带怎么办 已有6人参与

最近一直在做一个4kD小肽片段的western, 试过一般的SDS-Page,也尝试过tricine-SDS-page, 但是一直检测不到条带，
很是郁闷啊，这个小肽是一个前体蛋白经过酶切后的产物。我用的抗体也是一般常用的特异性抗体。上样量是30ug/孔。
是不是上样量太少的原因啊? 还有是不是因为这个小肽的产量不高？ 转膜方面， 我用的是100V 冰上转膜一个半小时，是不是转过了？

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花开花落，云卷云舒
1楼 2014-06-12 12:39:37
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★ ★ ★
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youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-07-08 10:45:42
4KD的肽要用SDS-PAGE，分离胶浓度至少应该在20%
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9楼2014-07-07 22:22:10
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yipan

铜虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-07-08 10:45:00
上样量加大，转膜1 h足够。分子量太小了，缩短转膜时间。
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2楼2014-06-12 13:09:37
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for5

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-07-08 10:45:07
分子量小就用浓度大点的胶，电压要看你胶转膜的大小。分子量小转膜会比较好转，理论上时间有点长，具体借鉴一下预染marker的情况。为确保wb没问题。做个内参吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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操蛋的XX
3楼2014-06-12 14:37:08
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wangxueflower

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by for5 at 2014-06-12 14:37:08
分子量小就用浓度大点的胶，电压要看你胶转膜的大小。分子量小转膜会比较好转，理论上时间有点长，具体借鉴一下预染marker的情况。为确保wb没问题。做个内参吧
...

我用过15%的胶，也都试过交联度为3和5的，用100V 电压，结果电泳跑大约一个小时后就显示error,自动停止了。我用的是biorad 的电泳仪，你在做实验的时候有没有出现这种问题啊，还是我们的电泳仪有问题？
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花开花落，云卷云舒
4楼2014-06-12 15:59:45
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