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旭旭大将军

银虫 (小有名气)

[求助] 关于连接转化的问题 已有6人参与

最近在做连接转化,目的是测序,目的基因长度在2000bp左右,用的连接试剂盒是天根,蓝白斑筛选后做PCR还是没有条带,已经做了很多次了,最近两次转化的板子上居然蓝斑白斑均没有,是空白的          有两个问题:1、基因一直连不上的原因是什么      2、这两次板子上什么都没长的原因是什么

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hutil1543

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-06-09 11:16:47
首先做正对照证实你PCR没有问题,再做正对照证明你提质粒没有问题,再做正对照证明你连接没有问题。如果都没有问题,你就把AT克隆改成粘末端连接
5楼2014-06-09 08:02:02
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查看全部 11 个回答

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
旭旭大将军(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-06-09 11:16:41
你要交代下你用的什么酶做PCR,连接体系之类的细节,我们才能帮到你

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-06-09 00:13:04
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旭旭大将军

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-09 00:13:04
你要交代下你用的什么酶做PCR,连接体系之类的细节,我们才能帮到你

PCR用的是老师带回来的takara的PCRmix ,不清楚是否带A,明天查一下。   胶回收浓度是50    链接是   T :1     DNA : 4    水2   T4:1   buffer:1
3楼2014-06-09 00:37:11
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 旭旭大将军 at 2014-06-09 00:37:11
PCR用的是老师带回来的takara的PCRmix ,不清楚是否带A,明天查一下。   胶回收浓度是50    链接是   T :1     DNA : 4    水2   T4:1   buffer:1...

检测的时候怎么做的?

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-06-09 00:39:04
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