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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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JICK159

木虫 (正式写手)

[求助] 本人目前遇到连接问题 已有7人参与

本人目前遇到连接问题,载体为枯草pp43nmk 6800bp,基因约1600bp,连接后跑胶多为一万以上的条带,转化后一点都不长,怎么破
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
JICK159(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-25 18:50:15
连接以后不需要跑胶啊,直接转化,你这个情况应该就是一次就能连上的啊。你说说你是怎么做的吧

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-04-25 17:28:42
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JICK159

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-25 17:28:42
连接以后不需要跑胶啊,直接转化,你这个情况应该就是一次就能连上的啊。你说说你是怎么做的吧

我连接后转化一直不长,我去跑胶试试,结果发现时一条大于一万条带
3楼2014-04-25 18:13:48
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jonew

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你链接了多少?还跑胶?把所有的连接产物全部加进去转化,就出来了,另外,如果12h没有斑,就多长几天,,,,
借口很贱,,,
4楼2014-04-25 18:15:38
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JICK159

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by jonew at 2014-04-25 18:15:38
你链接了多少?还跑胶?把所有的连接产物全部加进去转化,就出来了,另外,如果12h没有斑,就多长几天,,,,

张不了,24小时也不长
5楼2014-04-25 18:18:43
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jonew

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by JICK159 at 2014-04-25 18:18:43
张不了,24小时也不长...

再长一天
借口很贱,,,
6楼2014-04-25 18:44:12
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JICK159

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by jonew at 2014-04-25 18:44:12
再长一天

我放了3天基本全是杂菌
7楼2014-04-25 19:02:06
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zkz38210098

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你选的是那两个酶切位点。载体双酶切完全吗?
8楼2014-04-27 09:41:29
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JICK159

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zkz38210098 at 2014-04-27 09:41:29
你选的是那两个酶切位点。载体双酶切完全吗?

应该完全,切后基本只有两条带,一条是原来就有的基因890bp,还有就是质粒6800bp,酶切是用buffer r pstI和hindIII
9楼2014-04-27 12:17:55
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zkz38210098

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by JICK159 at 2014-04-27 12:17:55
应该完全,切后基本只有两条带,一条是原来就有的基因890bp,还有就是质粒6800bp,酶切是用buffer r pstI和hindIII...

你的连接体系是怎么样的?用什么公司的连接酶?按照说明书确定体系。载体跟目的片段的比例一般是1:3~9,注意是摩尔比不是体积比。还有检查下你的平板的抗性是否正确,我们以前有出现过质粒是氨苄抗性的转化涂板涂到卡那抗性平板上,结果当然什么都不长。也可以直接做个空载体转化涂板,确定你的平板没有问题。
10楼2014-04-27 17:02:51
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