应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 本人目前遇到连接问题
182/2返回列表上一页12
查看: 2204  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

refreshing11

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
JICK159: 金币+10, ★有帮助 2014-04-28 10:07:16
酶切连接首先要确保割胶回收的产物的质量，然后严格按照连接试剂盒的要求操作，保证载体和目的片段的量符合试剂盒的要求，中间任何一个缓解出问题都会影响连接的，再转化时是，可以做一个没有切过的质粒作对照，这个对照要保证能长出斑来，再试试吧
赞一下 回复此楼
11楼2014-04-27 18:07:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

raoreng
12楼2014-04-27 19:00:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

393658000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
JICK159: 金币+10, ★有帮助 2014-04-28 10:08:00
首先PstI是有星活性的，你虽然是显示切开了，但是会切坏，那样你肯定是连接不上去。如果可能的话你可以换个酶试试，或者先用O去切PstI,切好以后在纯化切HindIII试试。
赞一下 回复此楼
13楼2014-04-28 09:11:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

JICK159

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by zkz38210098 at 2014-04-27 17:02:51
你的连接体系是怎么样的？用什么公司的连接酶？按照说明书确定体系。载体跟目的片段的比例一般是1:3~9，注意是摩尔比不是体积比。还有检查下你的平板的抗性是否正确，我们以前有出现过质粒是氨苄抗性的转化涂板涂到 ...

连接酶，takara和博彩的都试过了，结果一样，抗性是amp的，应该没问题，我其他都在做的，摩尔比我知道，1：1-1:6都试过了，没有用
赞一下 回复此楼
14楼2014-04-28 10:06:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

JICK159

木虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by refreshing11 at 2014-04-27 18:07:23
酶切连接首先要确保割胶回收的产物的质量，然后严格按照连接试剂盒的要求操作，保证载体和目的片段的量符合试剂盒的要求，中间任何一个缓解出问题都会影响连接的，再转化时是，可以做一个没有切过的质粒作对照，这个 ...

我觉得环节应该没有问题，我做pet系统的基本都很成功
赞一下 回复此楼
15楼2014-04-28 10:07:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

JICK159

木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 393658000 at 2014-04-28 09:11:06
首先PstI是有星活性的，你虽然是显示切开了，但是会切坏，那样你肯定是连接不上去。如果可能的话你可以换个酶试试，或者先用O去切PstI,切好以后在纯化切HindIII试试。

我试试看吧，单切的
赞一下 回复此楼
16楼2014-04-28 10:08:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
也有可能是感受态细胞的问题
赞一下 回复此楼
rainwater
17楼2014-04-28 11:41:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhanggg709

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

载体可能有问题，给载体测序看看。或从公司里买新的载体，或找刚刚做成功的实验室引进载体。
赞一下(1人) 回复此楼
18楼2014-04-29 04:40:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 JICK159 的主题更新
182/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研化学学硕调剂，一志愿985 +3 张vvvv 2026-03-15 5/250 2026-03-16 20:25 by 张vvvv
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 材料专硕326求调剂 +4 墨煜姒莘 2026-03-15 4/200 2026-03-15 11:02 by dyw
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +7 邱gl 2026-03-10 11/550 2026-03-14 12:18 by 邱gl
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 招收0805（材料）调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 复试调剂 +9 Copy267 2026-03-10 9/450 2026-03-13 23:45 by userper
[考研] 304求调剂 +6 Mochaaaa 2026-03-12 7/350 2026-03-13 22:18 by 星空星月
[考研] 290求调剂 +9 ADT 2026-03-11 9/450 2026-03-13 21:55 by JourneyLucky
[考研] 285化工学硕求调剂（081700） +6 柴郡猫_ 2026-03-12 6/300 2026-03-13 20:46 by hmn_wj
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
[考研] 302求调剂 +6 负心者当诛 2026-03-11 6/300 2026-03-13 16:11 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 08食品或轻工求调剂，本科发表3篇sci一区top论文，一志愿南师大食品科学与工程 +3 我是一个兵， 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:21 by Yuyi.
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭