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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 做连接转化时遇到了问题，请教除了具体操作步骤，还需要详细注意什么细节？
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haocuihua

新虫 (初入文坛)

[交流] 做连接转化时遇到了问题，请教除了具体操作步骤，还需要详细注意什么细节？

做连接转化出了问题，长不出东西来，不知道连接转化除了基本步骤之外，还需要哪些具体的注意事项
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1楼 2014-03-15 12:44:03
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cxjzly2008

木虫之王 (文学泰斗)
★
haocuihua(金币+1): 谢谢参与
帮顶
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2楼2014-03-15 13:05:49
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宇盈

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
haocuihua(金币+1): 谢谢参与
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-16 14:45:59
haocuihua: 金币+1, 谢谢 2014-03-17 20:32:54
1看看你的感受态细胞是不是有问题，可以借别人的试试
2热击时温度是不是高了
3涂板时玻璃棒温度高 烫死了
4抗生素添加是否有问题
如果其他人也出现这种情况，就从培养液开始，重新弄
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4楼2014-03-15 14:12:08
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酷炫飙车

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也出现了转化失败的问题，现在挺纠结的，都不知道什么原因。
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6楼2014-03-18 14:23:40
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haocuihua

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 酷炫飙车 at 2014-03-18 14:23:40
我也出现了转化失败的问题，现在挺纠结的，都不知道什么原因。

说出来交流一下吧，我的结果出来了！
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7楼2014-03-18 16:24:29
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酷炫飙车

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by haocuihua at 2014-03-18 16:24:29
说出来交流一下吧，我的结果出来了！...

目的质粒是Amp抗性的，但是转化后筛选平板上一个菌没长。换条件换了好几次都没长一个菌。但是开始的含有目的质粒的菌是有Amp抗性的。
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8楼2014-03-20 16:05:41
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haocuihua

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 酷炫飙车 at 2014-03-20 16:05:41
目的质粒是Amp抗性的，但是转化后筛选平板上一个菌没长。换条件换了好几次都没长一个菌。但是开始的含有目的质粒的菌是有Amp抗性的。...

你怎么知道有抗性啊？你的传代次数呢，传代次数也是会影响活性的。你换个手试试！
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9楼2014-03-21 11:24:29
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
先看看感受态细胞转化效率是不是高，要不就是在确定酶切成功之后，你的酶连体系也很关键的。祝顺利！最近也在构载体，吐了

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10楼2014-03-22 10:37:49
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酷炫飙车

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by haocuihua at 2014-03-21 11:24:29
你怎么知道有抗性啊？你的传代次数呢，传代次数也是会影响活性的。你换个手试试！...

重组质粒是由生物公司合成的，设计的是用青霉素抗性筛选。并且已经用公司给的原始菌株做过Amp抗性验证。验证之后再提取的质粒。现在我们已经长出来了，原因可能是重组菌长得太慢，在倒置培养过夜后基本看不出明显菌落，所以以为重组失败。
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11楼2014-03-24 09:22:07
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NSDSKY_LZM

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也是，做了几次平板上什么都没长，不知道是什么原因，

[ 发自小木虫客户端 ]
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12楼2014-03-24 10:02:52
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haocuihua

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by NSDSKY_LZM at 2014-03-24 10:02:52
我也是，做了几次平板上什么都没长，不知道是什么原因，

你检测一下感受态的活性，再看看热激的时候时间一定要准确
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13楼2014-03-27 10:47:18
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
转化不长菌，不一定是转化的问题，有可能是酶切和连接的问题。这两个步骤出问题的概率更大一些。
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14楼2014-03-27 16:53:57
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syhorchid3楼
2014-03-15 13:54   回复  
haocuihua(金币+1): 谢谢参与
lihe1315楼
2014-03-15 15:12   回复  
haocuihua(金币+1): 谢谢参与
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