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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 切胶回收DNA分子变大，连不上T载体
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CJNicolas

银虫 (初入文坛)

[求助] 切胶回收DNA分子变大，连不上T载体 已有1人参与

最近在扩一个转录因子（1400bp），因后期需要做原核表达，故设计酶切位点扩增（kpnI BamHI）。条带扩出来，大小正确。送去测序，报告失败（因为用扩增引物测了个单向，但是测序结果显示前面600多bp是我的东西，而且还带kpnI我设计的酶切位点），但是回收时候，总是发现条带变大（如图，PCR重复3次，应该不是跑胶问题）。而且条带总是连不上T载体
  注：我同时在做两个转录因子，跟这个同一家族的转录因子已经原核表达做了出来，步骤一致，同时进行，应该试剂药品什么的没啥问题。但这个迟迟连不上，想问问有没有类似的情况，如何解决？多谢

切胶回收DNA分子变大，连不上T载体
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切胶回收DNA分子变大，连不上T载体-1
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1楼 2014-06-06 14:33:22
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-06 15:29:32
1 T载体效率下降
2 重新查看PCR引物和序列之间的关系，估计引物的事
3 建议做一次电子克隆
赞一下 回复此楼
人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2014-06-06 14:55:18
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