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CJNicolas

银虫 (初入文坛)

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专业: 生物化学

[求助] 切胶回收DNA分子变大，连不上T载体已有1人参与

最近在扩一个转录因子（1400bp），因后期需要做原核表达，故设计酶切位点扩增（kpnI BamHI）。条带扩出来，大小正确。送去测序，报告失败（因为用扩增引物测了个单向，但是测序结果显示前面600多bp是我的东西，而且还带kpnI我设计的酶切位点），但是回收时候，总是发现条带变大（如图，PCR重复3次，应该不是跑胶问题）。而且条带总是连不上T载体
注：我同时在做两个转录因子，跟这个同一家族的转录因子已经原核表达做了出来，步骤一致，同时进行，应该试剂药品什么的没啥问题。但这个迟迟连不上，想问问有没有类似的情况，如何解决？多谢

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1楼 2014-06-06 14:33:22

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

飞约疯人院

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科学怪人

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管辖: 分子生物

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-06 15:29:32

1 T载体效率下降
2 重新查看PCR引物和序列之间的关系，估计引物的事
3 建议做一次电子克隆

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