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永峰1230

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR产物 进行 酶切 已有3人参与

pcr 产物  条带单一, 可以 不割胶 ,使用试剂盒 纯化 酶切吗?     可以和  质粒 一起  酶切吗 ?  
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
永峰1230(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-06-04 08:23:19
永峰1230: 金币+3, 有帮助 2014-06-05 18:35:00
只要有合适的保护碱基,可以纯化后酶切
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2014-06-03 23:05:26
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luwei13566

木虫 (正式写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-06-05 10:12:52
引用回帖:
4楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-06-05 08:42:44
质粒和PCR产物混合到一起,,是不可以的 是吗?

PCR  产物 条带单一,,  产物出来后  -20℃保存后  ,还能在去 试剂盒纯化吗?   是不是 产物 跑电泳后  有 单一条带 ,立即 纯化比较好呢?谢谢...

1.质粒和PCR产物当然是分别酶切了,分别切都不一定能切完全呢,你混一起那不是更麻烦,酶连的时候怎么定量?
问题不大,只要不再反复冻融就好,自然越早纯化越好。PCR产物在4度下放3天再检测就已经不那么亮了。1个星期就能看到弥散条带了。

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大家相互帮助哈
5楼2014-06-05 09:44:27
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KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)

可以酶切,但是你能保证PCR产物没有发生突变吗?
7楼2014-06-05 21:02:12
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viki_MDK

银虫 (正式写手)

一起酶切不利于之后的连接,
9楼2014-06-07 00:00:45
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luwei13566

木虫 (正式写手)


永峰1230(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-13 19:27:41
引用回帖:
11楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-06-13 15:12:05
产物 酶切 如何 确定 酶切好了呢 ??  还是用  :  酶切 质粒 去 确定酶切条件  ,然后 用这个 条件 酶切产物呢?谢谢谢谢...

分别酶切:基因+酶+buffer+水切割后纯化,载体+酶+buffer+水切割后纯化,回收好后基因+载体+连接酶+buffer连接。最后感受态细胞+连接液转化。至于酶切酶连体系你多看看内切酶和连接酶的说明书。做实验前多和实验室的师兄师姐交流交流,别自己闷头做。

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大家相互帮助哈
13楼2014-06-13 17:10:57
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普通回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
永峰1230(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-06-04 08:23:24
永峰1230: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-05 18:35:18
PCR条带单一就适合用产物纯化试剂盒纯化。
LZ说的和质粒一起酶切不会是质粒和PCR产物混合到一起进行酶切的意思吧。。。

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大家相互帮助哈
3楼2014-06-03 23:30:27
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永峰1230

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-03 23:30:27
PCR条带单一就适合用产物纯化试剂盒纯化。
LZ说的和质粒一起酶切不会是质粒和PCR产物混合到一起进行酶切的意思吧。。。

质粒和PCR产物混合到一起,,是不可以的 是吗?

PCR  产物 条带单一,,  产物出来后  -20℃保存后  ,还能在去 试剂盒纯化吗?   是不是 产物 跑电泳后  有 单一条带 ,立即 纯化比较好呢?谢谢
12
4楼2014-06-05 08:42:44
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永峰1230

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-05 09:44:27
1.质粒和PCR产物当然是分别酶切了,分别切都不一定能切完全呢,你混一起那不是更麻烦,酶连的时候怎么定量?
问题不大,只要不再反复冻融就好,自然越早纯化越好。PCR产物在4度下放3天再检测就已经不那么亮了。1个 ...

en ,,hao d 好的  谢谢啊
12
6楼2014-06-05 15:45:13
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hailunl

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
永峰1230: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-06-07 08:50:32
如果载体构建,最好割胶回收。割胶回收更纯。
载体和产物不能一起酶切。
8楼2014-06-06 20:18:35
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永峰1230

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2014-06-03 23:05:26
只要有合适的保护碱基,可以纯化后酶切

如何知道  是否 酶切 好了 呢
12
10楼2014-06-13 15:09:31
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