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1楼 2014-06-03 23:02:40

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starseacow

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只要有合适的保护碱基，可以纯化后酶切

植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息

2楼2014-06-03 23:05:26

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luwei13566

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引用回帖:

4楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-06-05 08:42:44
质粒和PCR产物混合到一起，，是不可以的是吗？

PCR 产物条带单一，，产物出来后 -20℃保存后，还能在去试剂盒纯化吗？　　　是不是　产物　跑电泳后　　有　单一条带　，立即　纯化比较好呢？谢谢...

1.质粒和PCR产物当然是分别酶切了，分别切都不一定能切完全呢，你混一起那不是更麻烦，酶连的时候怎么定量？
问题不大，只要不再反复冻融就好，自然越早纯化越好。PCR产物在4度下放3天再检测就已经不那么亮了。1个星期就能看到弥散条带了。

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5楼2014-06-05 09:44:27

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可以酶切，但是你能保证PCR产物没有发生突变吗？

7楼2014-06-05 21:02:12

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一起酶切不利于之后的连接，

9楼2014-06-07 00:00:45

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luwei13566

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引用回帖:

11楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-06-13 15:12:05
产物酶切如何确定酶切好了呢？？还是用：酶切质粒去确定酶切条件，然后用这个条件酶切产物呢？谢谢谢谢...

分别酶切：基因+酶+buffer+水切割后纯化，载体+酶+buffer+水切割后纯化，回收好后基因+载体+连接酶+buffer连接。最后感受态细胞+连接液转化。至于酶切酶连体系你多看看内切酶和连接酶的说明书。做实验前多和实验室的师兄师姐交流交流，别自己闷头做。

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13楼2014-06-13 17:10:57

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luwei13566

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PCR条带单一就适合用产物纯化试剂盒纯化。
LZ说的和质粒一起酶切不会是质粒和PCR产物混合到一起进行酶切的意思吧。。。

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3楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-03 23:30:27
PCR条带单一就适合用产物纯化试剂盒纯化。
LZ说的和质粒一起酶切不会是质粒和PCR产物混合到一起进行酶切的意思吧。。。

质粒和PCR产物混合到一起，，是不可以的是吗？

PCR 产物条带单一，，产物出来后 -20℃保存后，还能在去试剂盒纯化吗？　　　是不是　产物　跑电泳后　　有　单一条带　，立即　纯化比较好呢？谢谢

4楼2014-06-05 08:42:44

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5楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-05 09:44:27
1.质粒和PCR产物当然是分别酶切了，分别切都不一定能切完全呢，你混一起那不是更麻烦，酶连的时候怎么定量？
问题不大，只要不再反复冻融就好，自然越早纯化越好。PCR产物在4度下放3天再检测就已经不那么亮了。1个 ...

en ,,hao d 好的谢谢啊

6楼2014-06-05 15:45:13

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hailunl

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如果载体构建，最好割胶回收。割胶回收更纯。
载体和产物不能一起酶切。

8楼2014-06-06 20:18:35

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2楼: Originally posted by starseacow at 2014-06-03 23:05:26
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如何知道是否酶切好了呢