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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » PCR产物 进行 酶切
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永峰1230

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR产物 进行 酶切 已有3人参与

pcr 产物  条带单一， 可以 不割胶 ，使用试剂盒 纯化 酶切吗？     可以和  质粒 一起  酶切吗 ？  
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12
1楼 2014-06-03 23:02:40
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
永峰1230(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-06-04 08:23:19
永峰1230: 金币+3, ★有帮助 2014-06-05 18:35:00
只要有合适的保护碱基，可以纯化后酶切
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2014-06-03 23:05:26
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luwei13566

木虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-05 10:12:52
引用回帖:
4楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-06-05 08:42:44
质粒和PCR产物混合到一起，，是不可以的 是吗？

PCR  产物 条带单一，，  产物出来后  -20℃保存后  ，还能在去 试剂盒纯化吗？　　　是不是　产物　跑电泳后　　有　单一条带　，立即　纯化比较好呢？谢谢...

1.质粒和PCR产物当然是分别酶切了，分别切都不一定能切完全呢，你混一起那不是更麻烦，酶连的时候怎么定量？
问题不大，只要不再反复冻融就好，自然越早纯化越好。PCR产物在4度下放3天再检测就已经不那么亮了。1个星期就能看到弥散条带了。
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永峰1230
大家相互帮助哈
5楼2014-06-05 09:44:27
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KEVIN_LOVE

木虫 (正式写手)
可以酶切，但是你能保证PCR产物没有发生突变吗？
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7楼2014-06-05 21:02:12
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viki_MDK

银虫 (正式写手)
一起酶切不利于之后的连接，
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9楼2014-06-07 00:00:45
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luwei13566

木虫 (正式写手)
★
永峰1230(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-13 19:27:41
引用回帖:
11楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-06-13 15:12:05
产物 酶切 如何 确定 酶切好了呢 ？？  还是用  ：  酶切 质粒 去 确定酶切条件  ，然后 用这个 条件 酶切产物呢？谢谢谢谢...

分别酶切：基因+酶+buffer+水切割后纯化，载体+酶+buffer+水切割后纯化，回收好后基因+载体+连接酶+buffer连接。最后感受态细胞+连接液转化。至于酶切酶连体系你多看看内切酶和连接酶的说明书。做实验前多和实验室的师兄师姐交流交流，别自己闷头做。
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永峰1230
大家相互帮助哈
13楼2014-06-13 17:10:57
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
永峰1230(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-06-04 08:23:24
永峰1230: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-05 18:35:18
PCR条带单一就适合用产物纯化试剂盒纯化。
LZ说的和质粒一起酶切不会是质粒和PCR产物混合到一起进行酶切的意思吧。。。
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永峰1230 永峰1230
大家相互帮助哈
3楼2014-06-03 23:30:27
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-03 23:30:27
PCR条带单一就适合用产物纯化试剂盒纯化。
LZ说的和质粒一起酶切不会是质粒和PCR产物混合到一起进行酶切的意思吧。。。

质粒和PCR产物混合到一起，，是不可以的 是吗？

PCR  产物 条带单一，，  产物出来后  -20℃保存后  ，还能在去 试剂盒纯化吗？　　　是不是　产物　跑电泳后　　有　单一条带　，立即　纯化比较好呢？谢谢
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12
4楼2014-06-05 08:42:44
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-05 09:44:27
1.质粒和PCR产物当然是分别酶切了，分别切都不一定能切完全呢，你混一起那不是更麻烦，酶连的时候怎么定量？
问题不大，只要不再反复冻融就好，自然越早纯化越好。PCR产物在4度下放3天再检测就已经不那么亮了。1个 ...

en ,,hao d 好的  谢谢啊
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12
6楼2014-06-05 15:45:13
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hailunl

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
永峰1230: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-06-07 08:50:32
如果载体构建，最好割胶回收。割胶回收更纯。
载体和产物不能一起酶切。
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8楼2014-06-06 20:18:35
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永峰1230

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2014-06-03 23:05:26
只要有合适的保护碱基，可以纯化后酶切

如何知道  是否 酶切 好了 呢
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12
10楼2014-06-13 15:09:31
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