5楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-05 09:44:27
1.质粒和PCR产物当然是分别酶切了，分别切都不一定能切完全呢，你混一起那不是更麻烦，酶连的时候怎么定量？
问题不大，只要不再反复冻融就好，自然越早纯化越好。PCR产物在4度下放3天再检测就已经不那么亮了。1个 ...

8楼: Originally posted by hailunl at 2014-06-06 20:18:35
如果载体构建，最好割胶回收。割胶回收更纯。
载体和产物不能一起酶切。

11楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-06-13 15:12:05
产物 酶切 如何 确定 酶切好了呢 ？？  还是用  ：  酶切 质粒 去 确定酶切条件  ，然后 用这个 条件 酶切产物呢？谢谢谢谢...

13楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-13 17:10:57
分别酶切：基因+酶+buffer+水切割后纯化，载体+酶+buffer+水切割后纯化，回收好后基因+载体+连接酶+buffer连接。最后感受态细胞+连接液转化。至于酶切酶连体系你多看看内切酶和连接酶的说明书。做实验前多和实验室 ...

12楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-06-13 15:13:29
如何 确定 酶切 好了呢？　保护碱基　只有那么一点点，，电泳　可以　看出吗？　　　还是　先　酶切质粒　确定好条件，用这个条件　来　酶切ＰＣＲ产物呢？？？...

3楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-03 23:30:27
PCR条带单一就适合用产物纯化试剂盒纯化。
LZ说的和质粒一起酶切不会是质粒和PCR产物混合到一起进行酶切的意思吧。。。

13楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-13 17:10:57
分别酶切：基因+酶+buffer+水切割后纯化，载体+酶+buffer+水切割后纯化，回收好后基因+载体+连接酶+buffer连接。最后感受态细胞+连接液转化。至于酶切酶连体系你多看看内切酶和连接酶的说明书。做实验前多和实验室 ...

17楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-06-23 11:16:47
请问，，割胶回收   ，可以 去除 DMSO 吗，，或者 甘油 可以去除的吧...